荧光染料的附着物的作用是有帮助荧光染料展色、提高荧光染料和下游树酯的相溶性、保护荧光染料的性能。通常载体树脂是强极性树脂,一方面有助色作用,增大荧光效率;另一方面与荧光染料有很好的相溶性。
荧光染料的结构特征:
1.分子内含有发射荧光的基团,如羰基、氮氮双键、碳氮双键等。
2.分子内含有助色基团。助色基团使光谱红移并增大荧光效率,如伯胺基、仲胺基、羟基、醚键、酰胺基 等。
3.分子内含有刚性平面结构的共轭π键。分子内共轭体系愈大平面性愈强其荧光强度愈高。
荧光染料是指某一波长的光波后发射出另一波长大于吸收光的光波的物质,多是含有苯环或杂环并带有共轭双键的化合物。
常用荧光染料具体介绍如下:
(一)**荧光标记常用的荧光染料
FITC(异硫氰酸荧光素):绿色530nm
PE(藻红蛋白):橙黄色575nm
488nm波长的氩离子激光激发
APC(别藻青蛋白):红色660nm
630nm波长的氦氖激光或红色二极管激光激发
PerCP(多甲藻黄素叶绿素蛋白):深红色675nm
PI(碘化丙啶):橙红色620nm
(二)细胞自发荧光
自发荧光信号为噪声信号,在多数情况下会干扰对特异荧光信号的分辨和测量。在**细胞化学等测量中,对于结合水平不高的荧光抗体来说,如何提高信噪比是个关键。
(三)**荧光标记
常用的标记染色为直接**荧光染色和间接**荧光染色。在进行双参数或多参数分析时,常常需要进行荧光抗体的组合标记,目前已经有双色、三色以及四色标记。