西安百萤生物科技有限公司
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钙离子荧光探针Fluo4的复染方法

发布时间:2019-07-12
 
1. PBS平衡
2. PBS稀释DAPI stock液至300nM,滴加300μL这种稀释液于细胞上。
3. 孵育5分钟。
4. PBS中涮洗几次,涳干过量缓冲液,抗淬灭剂封片。
FISH复染:
钙离子荧光探针Fluo4在dH2O中洗以去除残留缓冲盐溶液,有助于减少玻片上非特异背景。
1. PBS中稀释至30nM,吸300μL滴于样品上,塑料玻片有助于平均分配染料。
2. 黑暗室温孵育30分钟。
3. 去掉盖玻片,PBS和dH2O中小心盥洗。
4. 去掉过量液体,绵纸在样品边缘小心吸取。
5. 盖上盖玻片,蜡或指甲油封片。或按供应商的指导加抗淬灭剂。
荧光显微镜观察。
Rhodamine 123 染色
中文名称:罗丹明 123
目 的:测细胞内线粒体的跨膜电位
EX/EM: 505/534
染液配制: 罗丹明123 粉剂用甲醇配制成1mg/ml的储备液,100ul/支分装,-20℃保存。染色时用Dulbecco’s PBS缓冲液将其稀释为5ug/ml。
染色步骤:
培养细胞
Dulbecco’s PBS缓冲液漂洗2~3次(缓冲液预热至室温或37℃)
Rhodamine 123(5ug/ml) 37℃孵育1小时
Dulbecco’s PBS缓冲液漂洗2~3次
加0.5ml Dulbecco’s PBS,上机测量
Fluo-3-AM 染色 (测细胞内游离钙离子浓度)
染液配制:Fluo-3-AM 50ug溶于45ul DMSO(Fluo-3-AM浓度 1mM),15ul/支分装,-20℃保存。染色时用15~50mM HEPES缓冲液将其稀释为1~20uM(如1.5ml 为10uM)。
染色步骤:
培养细胞
缓冲液漂洗2~3次
Fluo-3-AM (1~20uM) 37℃或室温孵育0.5~1小时
缓冲液漂洗2~3次
加0.5ml 缓冲液,上机测量。



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