百萤对*近收到的许多客户关于转染实验遇到的问题进行了总结归纳,希望可以给其他准备/正在做相关实验的同学一点小小的帮助。
以下是转染实验三大问题详细解答
1.哪种水平的DNA纯度*适合转染?
回答:
虽然DNA纯度和浓度有一定范围,但是包括所选的转染试剂在内的几个因素可能会影响特定的过程。
建议:
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比较DNA /试剂浓度以获得*佳性能。
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在混合前检测DNA和试剂的不同孵育时间。
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将内**水平尽可能保持在*低。
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A260 / A280的*理想纯度范围为(1.7-1.9),首先尝试在此范围内进行调整。
2.如何使用流式细胞仪确定转染效率?
回答:
使用流式细胞仪,确定特定转染程序非常容易:
建议:
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使用未转染的细胞进行对照,并从实验结果中减去基线强度数据。
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信号强度图是比较细胞系对不同转染试剂反应*简单有效的实验辅助工具。
一般不需要太多手动分析,大多数仪器都具有自带的FACS分析程序的软件,可快速获得结果。
3.转染后我的细胞快要死了,我该怎么办?
回答:
转染后细胞死亡有许多可能的原因,我们建议您使用以下三种方法进行检查:
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在不使用试剂的情况下对DNA进行额外的监测:表达的蛋白质可能具有毒性。
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检查是否有污染并根据需要进行处理,或者使用新的培养液进行实验。
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选择***可能太强或添加太早。请以更低的浓度和更长的间隔再次尝试实验。
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以上是转染实验三大问题详细解答,希望可以帮助到您