9.问：Cy3酰肼可以用于哪些应用领域？
答：Cyanine 3 酰肼（货号146） 可以与含有醛基或酮基的分子反应，形成稳定的酰肼键。这种染料可以用于标记经过过氧化物酶氧化后的抗体和其他糖蛋白，或者标记受到氧化应激或脱氨作用的蛋白质，或者标记还原性的糖类。Cy3 NHS酯（货号141）可以与含有氨基的分子反应，形成稳定的酰胺键。这种染料可以用于标记多肽、蛋白质和寡核苷酸中的氨基末端或伯胺。如果需要该类产品进行蛋白/抗体染色，请根据目标的反应基团和功能基团，按
需选择。
10.问：Cy3NHS酯标记蛋白或抗体后，如何高效纯化？
答：（1）（实验常用）用凝胶过滤层析法：将标记反应液通过大小孔径合适的凝胶过滤柱，用适当的缓冲液洗脱，收集流出液中的Cy3-蛋白标记物，并测定蛋白浓度和荧光强度。这种方法简单快速，但可能会造成一些蛋白损失或稀释。
（2）用逆相高效液相色谱法（RP-HPLC）：将标记反应液通过逆相C18柱，用不同比例的水和有机溶剂（如乙腈或甲醇）作为流动相进行梯度洗脱，收集适当的色带峰，冷冻干燥后得到Cy3-蛋白标记物。这种方法可以有效地分离和纯化Cy3-蛋白标记物，但需要专业的仪器和操作技术。
（3）用亲和层析法：如果待标记的蛋白具有特定的亲和性，可以利用亲和层析法进行纯化。例如，如果待标记的蛋白是抗体，可以用蛋白A或蛋白G柱进行纯化；如果待标记的蛋白是GST融合蛋白，可以用谷胱甘肽柱进行纯化。这种方法可以保留蛋白的活性和稳定性，但需要特定的亲和配体和缓冲液。
11.问：Cy3链霉亲和素和Cy3NHS酯在蛋白的标记方面有何区别？
答：Cy3链霉亲和素（货号16912）是一种将Cy3荧光染料与链霉亲和素（streptavidin）结合的偶联物，可以用于检测生物素化的生物分子，例如抗体、配体或DNA探针。
它可以用于间接标记法，即先用生物素化的**抗体或其他生物素化的探针与目标蛋白结合，然后用Cy3链霉亲和素与生物素结合，产生荧光信号。
Cy3链霉亲和素的操作方法取决于所使用的生物素化探针的类型和浓度，一般来说，需要先将样品与生物素化探针孵育，然后用PBS或其他适当的缓冲液洗涤去除多余的探针，再加入适量的Cy3链霉亲和素孵育，*后再次洗涤去除多余的偶联物，就可以进行荧光检测了。
12.问：Cy3叠氮化物和炔烃有什么关系？这两个产品如何标记蛋白？
答：Cy3炔烃（货号144）和叠氮化物（货号143）可以在铜催化下发生[3+2]环加成反应，生成1,4-二取代的1,2,3-三唑衍生物，这种衍生物是Cy3染料的一种形式。
这种反应属于点击化学的范畴，因为它是高效、选择性和正交的，即它不会受到其他官能团的干扰，也不会产生副产物。
Cy3炔烃和叠氮化物可以用来标记蛋白的方法是，将含有Cy3炔烃的蛋白和含有叠氮化物的标记分子（如抗体或其他配体）在铜催化下发生点击化学反应，形成稳定的三唑连接，从而实现蛋白的荧光标记。
这种方法的优点是，它可以在温和的条件下进行，不会破坏蛋白的结构和功能，而且反应选择性高，不会受到其他官能团的干扰。 另外，Cy3染料是一种亮度高，荧光稳定，对pH不敏感的橘黄色荧光染料，它可以用532 nm激光线激发，并用TRITC滤光片组观察。
13.问：Cy3 TCO是什么？它与Cy3 NHS相比有什么区别？
答：Cy3反式环辛烯 [Cy3 TCO]（货号900）是一种荧光染料，可以与四唑类化合物发生快速的点击反应，形成稳定的共轭物。Cy3 TCO的优点是反应速度快，无毒，适用于多种生物体系。缺点是染料分子较大，可能影响标记分子的活性或稳定性。
Cy3反式环辛烯 [Cy3 TCO]和Cy3 NHS酯 [Cy3 NHS]是两种不同的荧光染料，它们都可以用于标记含有氨基的生物分子，但是它们的反应机制和条件有所不同。Cy3 TCO是一种点击化学试剂，它可以与四唑类化合物发生快速的无副产物的环加成反应。这种反应可以在水相或有机相中进行，不受pH、温度、缓冲液等因素的影响。Cy3 NHS酯是一种活化酯试剂，它可以与氨基形成酰胺键3。这种反应需要在pH 7-9的缓冲液中进行，且受到水解、氨基竞争等因素的影响。因此，Cy3 TCO比Cy3 NHS酯具有更高的反应效率和选择性，更适合标记活性或稳定性较低的生物分子。所以如果需要标记含氨基的生物分子，选择不止Cy3NHS酯，Cy3 TCO也许是您实验的更优良选择，考虑自己的实验条件，选择*佳产品，可以事半功倍。
14问：Cy3四嗪是什么？它与其他常见的Cy3染料有何不同？
答：Cy3 tetrazine（货号910）和其他Cy3染料的主要区别在于它们的反应基团和反应方式。Cy3 tetrazine是一种带有四唑基团的荧光探针，它可以与TCO（反式-环辛烯）或其他应力烯烃发生特异性的点击化学反应，形成稳定的生物结合物。这种反应具有快速、高效、无毒和无铜的优点。
15.问：PE-Cy5 Tandem和普通的Cy5染料相比，有什么优势？
答：（1）PE-Cy5 Tandem（货号2610）与FITC、PE在光谱上重叠范围小，荧光干扰少，因此实验中常将PE-Cy5 Tandem与FITC、PE搭配使用。普通的Cy5染料与单核细胞和粒细胞的非特异性结合多，实验结果容易出现假阳性。
（2）PE-Cy5 Tandem具有较高的荧光强度和稳定性，可用于标记表达水平较低的蛋白。普通的Cy5染料的荧光强度和稳定性较低，适用于标记表达水平较高的蛋白。
（3）二者的染色步骤类似，主要根据蛋白的表达水平选择适合自己实验的产品。
16问：Cy5DIGE NHS酯是什么？它和Cy5NHS酯有什么区别？
答：Cy5DIGE NHS ester（货号25306）是一种专门用于差异凝胶电泳（DIGE）分析的染料，它可以与C2DIGE和/或C3DIGE一起使用，来比较两个或三个样品中的蛋白质表达。Cy5DIGE NHS ester具有**的迁移匹配和高分辨率的蛋白质检测能力。Cy5NHS则是一种更通用的染料，它可以用于标记核酸分子（DNA和RNA）以及其他生物分子。