基本信息
货号：21506（1 mg）
储存条件：储存在-20°C，干燥并避光
保质期：到期日为自收到之日起12个月
简介
Thiolite™Blue是用于测量硫醇化合物灵敏的传感器之一。 它在与硫醇化合物（例如GSH和半胱氨酸）反应时产生蓝色荧光加合物。 它可用于量化蛋白质上半胱氨酸的数量。 我们用它来荧光测定谷胱甘肽。它与含巯基的化合物反应后具有> 200倍的荧光增强。 Thiolite™Blue是mBBr（monobromobimane）的优良替代品，因为它们具有相似的spcetral属性。 与mBBr相比，Thiolite™Blue的硫醇加合物具有比mBBr更强的荧光和吸收，使其成为比溴代溴醚更敏感的硫醇探针。Thiolite™Blue针对细胞内硫醇检测进行了优化。它在细胞外是非荧光的，消除了洗涤步骤并减少了测定背景。
物理化学特性
分子量：331.28
溶剂：二甲基亚砜（DMSO）
光谱特性：激发= 335nm; 发射= 460nm
用于流式细胞仪的ThioliteTM Blue AM的测定方案的实例
简要总结
使用测试化合物制备细胞®
添加1X染料工作溶液®
在室温或37 oC下孵育染料染料10至30分钟®
去除染料工作溶液®
用EX/ Em = 335/460 nm的流式细胞仪进行分析
注意：以下是我们推荐的细胞巯基测定方案。 该方案仅提供指南，应根据您的特定需求进行修改。
1.准备Thiolite Blue™AM工作溶液：
在高质量无水DMSO中制备1至5 mM的Thiolite™Blue原液。 应及时使用原液; 需要将任何剩余的溶液等分并在-20℃冷冻。
注意：未使用的Thiolite Blue原液应分成单次使用的等分试样并储存在-20oC，避光。
2.准备1X染料工作溶液
在使用前，在Hanks和20 mM Hepes缓冲液（HHBS）或您选择的缓冲液（pH 7）中稀释DMSO储备溶液（来自步骤1），制备1X染料工作溶液。 通过涡旋将它们充分混合。
注意：染料工作溶液的浓度应根据经验确定不同的细胞类型和/或实验条件。 建议在至少超过十倍范围的浓度下进行测试。 Jurkat细胞中的推荐浓度为1-10uM。
3.用流式细胞仪或荧光显微镜分析细胞：
3.1用测试化合物处理细胞一段所需的时间。
3.2离心细胞，每管取1-5×105个细胞。
3.3将细胞重悬于1 mL染料工作溶液中（来自步骤2）。
可选：可以直接将DMSO储备溶液添加到细胞中，无需去除培养基（例如，将1μL1mMDMSO储备溶液加入1 mL细胞中）
3.4在室温或37°C下用染料溶液孵育细胞10到30分钟，避光。
3.5从细胞中取出染料工作溶液，用HHBS或您选择的缓冲液清洗细胞。 将细胞重悬于1mL预热的HHBS或培养基中，得到每管2-10×105个细胞。
3.6使用流式细胞仪或荧光显微镜监测Ex / Em 335/460 nm处的荧光变化。