D-虫荧光素是萤火虫荧光素酶底物，其量子效率为0.88，是Luminol的20倍。反应原理：首先，在镁离子存在下荧光素酶使荧光素与ATP反应，接着它被氧化形成二氧杂环丁烷结构并发出黄绿色的光。Luciferin-luciferase发光用于ATP监控以测定细胞活力以及**计数。它还用于报告基因检测。可与小动物活体成像系统配套使用，用于标记LUC基因后的体内活体荧光检测。
D虫荧光素钾盐体外分析方法：
(1)用无菌水配置200×的D-Luciferin储备液(30mg/mL)，立即使用，或-20℃保存。
(2)用预热好的完全培养基1∶200稀释D-Luciferin储备液，配置工作液(150μg/mL)。
(3)去除培养细胞的培养基。
(4)进行图像分析前，向细胞中添加1× 的D-Luciferin工作液，进行图像分析。
(5)溶解D-Luciferin时要完全。
(6)在图像分析前，将细胞进行37℃的短时间培养可以增加信号强度。
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