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D虫荧光素钾盐使用方法的描述

发布时间:2020-10-13
    D虫荧光素钾盐是萤火虫荧光素酶底物,其量子效率为0.88,是Luminol的20倍。反应原理:首先,在镁离子存在下荧光素酶使荧光素与ATP反应,接着它被氧化形成二氧杂环丁烷结构并发出黄绿色的光。Luciferin-luciferase发光用于ATP监控以测定细胞活力以及**计数。它还用于报告基因检测。可与小动物活体成像系统配套使用,用于标记LUC基因后的体内活体荧光检测。

D虫荧光素钾盐使用方法:

1. 活体成像分析方法

   (1)    用DPBS(w/o Mg2+、Ca2+)配置D-Luciferin工作液(15mg/mL)* ,0.2 μm滤膜无菌过滤。

   (2)    注射量:10μL/g的体重,如10g 重小鼠,注射100μL 工作液(1.5 mg D-Luciferin)。

   (3)    腹腔注射10~15分钟后,上机进行图像分析。

2. 体外分析方法

   (1)    用无菌水配置200× 的D-Luciferin储备液(30mg/mL)*,立即使用,或-20℃保存。

   (2)    用预热好的完全培养基1∶200稀释D-Luciferin储备液,配置工作液(150μg/mL)。

   (3)    去除培养细胞的培养基。

   (4)    进行图像分析前,向细胞中添加1× 的D-Luciferin工作液,进行图像分析**。

    * :溶解D-Luciferin时要完全。

    **:在图像分析前,将细胞进行37℃的短时间培养可以增加信号强度。

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