钙黄绿素活性染料选择指南

钙黄绿素 AM 是一种膜渗透性荧光酯酶底物，通常用于检测细胞活性和质膜完整性。作为一种近中性的底物，钙黄绿素 AM 可以自由、无创地扩散穿过质膜并渗透到活细胞的胞质溶胶中。一旦进入细胞内，代谢活跃细胞中的胞质酯酶会迅速将非荧光钙黄绿素 AM 底物水解成钙黄绿素产物，并由具有完整质膜的细胞保留。由于死细胞缺乏酯酶活性，因此仅标记活细胞。在蓝光激发下，钙黄绿素发出强烈的绿色荧光，与细胞酯酶的活性和样品中存在的活细胞数量成正比。与其他活细胞标记试剂（如 BCECF AM 或羧基荧光素二乙酸酯）相比，钙黄绿素 AM 荧光更亮、光稳定性更好，低细胞毒性有利于细胞追踪、细胞凋亡和细胞毒性的研究。
 

      AAT Bioquest 提供多种可供选择的用于细胞活力分析的钙黄绿素 AM 产品。除了传统的绿色荧光钙黄绿素 AM 之外，我们还提供发出蓝色、橙色、红色和深红色荧光的钙黄绿素 AM 衍生物。

钙黄绿素活性染料选择指南

Calcein Blue AM, Calcein Orange™ Diacetate, Calcein Red™ AM, and Calcein Deep Red™ AM 用于多功能分析

Calcein AM ( 22004 ) 是细胞活星的主要指标，它具有被动的细胞内扩散、低细胞毒性、出色的细胞保留以及在生理 pH 范围内的强荧光强度。因此，钙黄绿素在 ~ 521 nm 处的荧光发射*大值使得与 GFP 转染细胞或其他绿色荧光指示剂结合使用以进行多重分析具有挑战性。为了解决钙黄绿素 AM 的单一颜色限制，AAT Bioquest 开发了具有多种颜色选择的钙黄绿素衍生物，包括钙黄绿素蓝 AM、钙黄绿素橙™ AM、钙黄绿素红™ AM 和钙黄绿素深红™ AM 染料，用于多色标记和活细胞的功能分析（表 1）。
 

Calcein Blue AM

Calcein Blue AM (22007) 是一种 UV-light 可激发活性指示剂，可在 pH 4-11 下发出明亮的蓝色荧光 (Em = ~441)，专为与检测蓝色荧光的仪器一起使用。它可以与磷脂酰丝氨酸染色剂Annexin V iFluor® 488 (20071) 和核酸死细胞染色剂7-AAD (17501) 结合使用，用于活/凋亡/坏死细胞群的三色分（图 1），如以及用于多色功能分析的 GFP、RFP 和其他绿色或红色荧光探针。
 

Calcein Orange™ Diacetate

Calcein Orange™ diacetate (22007)   是蓝/绿光可激发活力指示剂，可发出明亮的橙色荧光 (Em = ~545 nm)。与 calcein AM 一样 .Calcein Orange™ diacetate 是一种非荧光透膜底物，需要酯酶水解才能激活其荧光，Calcein Orange™ 在质膜未受损的活细胞中具有出色的细胞滞留性，使其成为一种有价值的细胞示踪剂和活细胞标记试剂。它可以与蓝色或绿色荧光探针结合使用，例如 Hoechst 33342 (17535, 图 2) 或者钙指示剂 Cal-520^® AM (21130),
 

Calcein Red™ AM and Calcein Deep Red™ AM

 Calcein Red™ AM (21900) 和 Calcein Deep Red™ AM (22011). 在被胞质酯酶水解后, Calcein Red™ (Ex/Em = 562/576 nm) 和Calcein Deep Red™ (Ex/Em = 643/663 nm) 被细胞膜完整保留并在对应的光源激发下发出黄色或红色荧光 ，Calcein Red™ AM 和 Calcein Deep Red™ AM 均可与蓝色和绿色荧光探针结合使用
 

CytoCalcein™ Violet 450

Calcein Orange™ Diacetate

Calcein Deep Red™ AM

 用Calcein™ Blue AM (blue,22007), Annexin V iFluor® 488 (green, 20071), 和 7-AAD (red, 17501).;对 Staurosporine 处理的 Jurkat 细胞进行染色；使用Calcein Orange™ diacetate (22007) 和 核酸染料Hoechst 33342 (17535).; 流式细胞术分析用2 µM Calcein Deep Red™ AM (22011, 红色）染色的活 Jurkat 细胞和在 55°C 水浴中处理 30 分钟的死细胞群（绿色）使用 NovoCyte 3000 流式细胞仪。 
 

表1.钙黄绿素，AM特性

CytoCalcein™ Violet Viability 针对流式细胞术和成像进行了优化

CytoCalcein™ Violet 450 和 CytoCalcein™ Violet 500 针对流式细胞仪的使用进行了优化， 将非荧光 CytoCalcein™ Violet 450 AM 和 CytoCalcein™ Violet 500 AM 酶促转化为高荧光 CytoCalcein™ Violet 450 和 CytoCalcein™ Violet 500 产品（Ex/Em maxima ~406/445 nm，在大多数流式细胞仪中都有发现。结合带有红色荧光核酸死细胞染料的碘化丙锭（PI，Ex/Em maxima ~537/618 nm）或 7-Aminoactinomycin D（7-AAD，Ex/Em ~549/648 nm），CytoCalcein™ Violet 染料是出色的荧光团，用于膜完整性和酯酶活性对活细胞和死细胞进行双色分别。去除代表死细胞的数据点是提高流式细胞术分析准确性的关键步骤。
CytoCalcein™ Violet 450 和 CytoCalcein™ Violet 500 可作为 1 mg 单位规格的独立试剂使用。此外，CytoCalcein™ Violet 450 在 Cell Meter™ 细胞活力检测试剂盒中用作活力指示剂 *405 nm 激发的蓝色荧光* (22784)。该试剂盒提供优化的细胞标记方案和充足的试剂，包括 CytoCalcein™ Violet 450、DMSO 和缓冲液，可使用 200 µL 分析体积和标准荧光酶标仪进行 500 次测试。还可用于标记活细胞，用于荧光流式细胞术和细胞功能的显微研究。
 

CytoCalcein™ Violet 450

CytoCalcein™ Violet 450 ( 22012 ) 的激发和发射光谱。
 

CytoCalcein™ Violet 500

 CytoCalcein™ Violet 500 ( 22013 ) 的激发和发射光谱

Table 2. 用于流式细胞术的细胞钙素AM活性染料的特性