百萤课堂之DNA定量试剂盒的实验方案

高灵敏度荧光的DNA定量试剂盒针对CytoCite和Qubit荧光分析仪进行了优化。DNA定量是用于各种基因组分析的DNA样品制备中非常重要的。 这种Portelite dsDNA定量试剂盒提供了一种使用手持式荧光分析仪使用Helixyte Green探针定量dsDNA的快速方法。 它针对Cytocite 和Qubit 荧光计进行了优化。 Portelite dsDNA定量分析线性超过五个数量级。 该测定法对RNA上的双链DNA（dsDNA）具有高度选择性，并且设计为对于25pg / uL至100ng / uL的初始样品浓度是准确的。 Helixyte Green在与dsDNA结合后表现出大的荧光增强，并且比UV吸光度读数更敏感。

一．百萤DNA定量试剂盒适用仪器

量子位荧光计

Ex:  480nm

Em:  520nm

规格:0.2mL PCR小瓶

CytoCite荧光计

Ex:  480nm

Em:  520nm

规格:0.2mL PCR小瓶

二．百萤DNA定量试剂盒实验方案

溶液制备

Helixyte Green 工作溶液制备：
为10个样品制备足够的工作溶液，将10μL Helixyte Green （组分A）加入2 mL DNA分析缓冲液（组分B）中。 注意：用铝箔覆盖或将其置于黑暗中，以保护工作溶液免受光照。 注意：我们建议将此溶液用塑料容器而不是玻璃制备，因为染料可能会吸附到玻璃表面。 为获得佳效果，该溶液应在其制备后几小时内使用。

样品实验方案

样品体积是1~20μL（取决于DNA样品的估计浓度）。推荐样品体积为10μL，DNA浓度范围为0.5~10 ng /μL。如果使用其他样品量，请在浓度计算中调整稀释倍数。

1.基于10μL样品体积生成以下方案，DNA浓度在0.5~10 ng /μL范围内。

1.1在每个Cytocite 样品管（＃CCT100）或等效的0.2 mL PCR管中加入190μL1XHelixyte Green 工作溶液注意：使用薄壁聚丙烯，透明的0.2 mL PCR管，如＃CCT100。

1.2将DNA标准品或测试样品10μL加入每个试管中，然后涡旋混合2~3秒。

1.3让所有试管在室温下孵育2分钟。

1.4将样品插入CytoCite 或Quibit ，并用绿色荧光通道监测荧光。按照适用于CytoCite 荧光分析仪的步骤进行操作。

2.标准校准曲线的制备

对于Portelite 分析，您可以选择使用DNA标准制作校准曲线。 以下是生成定制DNA标准曲线的简要方案：

2.1用DNA Assay Buffer进行稀释，得到10,8,6,4,2,1,0.5,0 ng /μLDNA标准稀释液。

2.2将190μLHelixyteGreen 工作溶液加入0.2 mL PCR管中。

2.3每管加入10μL标准品或10μL样品。

2.4在室温下孵育反应2分钟。

2.5将样品插入CytoCite 并用绿色荧光通道检测荧光。

数据分析

从空白标准孔获得的读数（RFU）用作阴性对照。 从其他标准的读数中减去该值，以获得基线校正值。 然后，绘制标准读数以获得标准曲线和方程。 该等式可用于计算浓度样本。