细胞增殖测定是在细胞生物学发现研究中具有广泛应用价值的工具。它们通常用于评估正常细胞的健康状况，对评估新型化疗药品的抗增殖效力和复合毒性至关重要。AAT Bioquest 提供了几种评估细胞增殖的策略，这些策略基于跟踪细胞分裂的世代或监测细胞健康的关键参数，包括代谢活性、 DNA 合成或 ATP 浓度。从广泛的传统比色测定试剂中选择用于确定细胞增殖的试剂，特别是四唑盐，以及用于流式细胞术、成像和微孔板应用的几种高度敏感的基于荧光的测定方法。
一．细胞增殖的测定方法
测定细胞增殖准确的方法是在 DNA 复制过程中通过 BrdU掺入来测定新合成的 DNA。尽管这种方法具有高度的准确性和可重复性，但由于随后用荧光抗 BrdU 抗体进行检测是测量增殖所必需的，因此这种方法可能相当繁琐。或者，通过用 WST，resazurin 或细胞酯酶分离染料测量代谢活性的速率或用 CytoTellTM 染料或 CFSE 跟踪细胞分裂的世代，可以更快地评估细胞增殖。选择适合的细胞增殖试验主要取决于细胞类型，研究方案，以及希望研究的作用机制。
二．DNA合成细胞增殖实验
原位测定新合成的 DNA 是鉴定增殖细胞可靠方法。实现这一点的方法是在细胞周期的 S 期将 BrdU细胞增殖检测试剂 (17030)添加到新复制的 DNA 中。然后可以使用荧光标记的抗 BrdU 抗体来测量增殖的 BrdU 标记细胞。BrdU 染色适用于各种应用，包括 IHC、 ICC 和 ELISA，并且可以用流式细胞术中适合的其他生物标志物进行染色。我们提供用 PE (V103305)标记的小鼠单克隆抗 BrdU 抗体克隆 Bu20a 和未标记的小鼠单克隆抗 BrdU 抗体克隆 Bu20a (V103300)和克隆 MoBu-1(V103295)的荧光缀合物，其可以用我们亮和光稳定的 iFluor系列染料标记。
点击-化学驱动的 BucculiteTM XdU 细胞增殖测定
与 BrdU 测定不同，BucculiteTM XdU 细胞增殖测定不依赖于抗体来量化新生 DNA，也不需要 DNA 变性来促进 BrdU 标记核苷的抗体检测。相反，BucculiteTM XdU 细胞增殖测定使用含炔的胸苷类似物 XdU 的专有混合物，其掺入到新合成的 DNA 中，随后通过铜催化的叠氮化物-炔环加成检测(即单击反应，图1)。
细胞增殖测定原理。在 XdU 存在下的增殖细胞在 S 期加入了胸腺嘧啶碱基的化合物。荧光标记的叠氮化合物与掺入的 XdU 反应，以便通过成像或流式细胞仪进行检测(图在 BioRender 中制作)。
由于点击反应利用双正交部分检测增殖细胞，背景干扰是小的。更重要的是，由于反应条件温和，BucculiteTM XdU 细胞增殖测定法保留了细胞形态，抗原结合位点和样品完整性，为用户提供了用细胞周期染料，针对细胞表面标记物的抗体和荧光蛋白进行多重分析的机会。在 XdU 掺入后，点击反应和随后的洗涤步骤可以在60分钟内完成，并且新生 DNA 可以使用标准成像系统或流式细胞仪进行定量。还提供环境的无铜 BucculiteTM FdU 细胞增殖测定绿色，红色和深红色荧光。这些试剂盒利用我们的 BuccutteTM 标记化学，以促进检测新合成的 DNA 在活跃增殖的细胞。
用 Bucculite XdU 细胞增殖试验检测 IL 细胞增殖。使用 Bucculite XdU 细胞增殖 iFluor 488成像试剂盒(22326)和 Bucculite XdU 细胞增殖 iFluor 647成像试剂盒(22328)中提供的试剂和固定/检测方案处理 HeLa 细胞。两个样本均用 Hoechst 33342核酸染色(17530)进行复染，并用荧光显微镜成像。
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产品名称
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规格
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货号
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Bucculite XdU细胞增殖荧光成像试剂盒“红色荧光”
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200Tests
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22327
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Bucculite XdU细胞增殖荧光成像试剂盒“绿色荧光”
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200Tests
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22326
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Bucculite XdU细胞增殖荧光成像试剂盒“深红色荧光”
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200Tests
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22328
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Bucculite XdU细胞增殖检测试剂盒“红色荧光兼容”“流式细胞术”
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100Tests
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22325
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Bucculite XdU细胞增殖检测试剂盒“蓝色激光兼容”“流式细胞术”
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100Tests
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22323
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Bucculite FdU细胞增殖荧光成像试剂盒“红色荧光”“无铜”
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200Tests
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22315
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Bucculite FdU细胞增殖荧光成像试剂盒“绿色荧光”“无铜”
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200Tests
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22305
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Bucculite FdU细胞增殖荧光成像试剂盒“深红色荧光”“无铜”
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200Tests
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22320
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BrUTP*10mM溶于TE Buffer*细胞增殖检测
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100ul
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17032
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BrdUTP*10mM溶于TE Buffer*细胞增殖检测
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100ul
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17031
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表1.可用于流式细胞术和增殖实验的产品