Portelite 荧光 ssDNA 定量试剂盒实验方案

Portelite 荧光 ssDNA 定量试剂盒用于快速检测单链 DNA。该试剂盒包含所有基本试剂，包括 Helixyte Green ssDNA 试剂、稀释缓冲液和预稀释的 DNA 标准品。 Helixyte Green ssDNA 试剂是一种灵敏的荧光核酸探针，用于定量溶液中的寡核苷酸和单链 DNA (ssDNA)。只需使用提供的缓冲液稀释试剂，添加样品（可接受 1–20 μL 的任何体积），然后使用 CytoCite、Qubit® 或其他手持或台式荧光计（Qubit® 是 ThermoFisher 的商标）读取浓度。该检测对于 50 pg/µL 至 200 ng/µL 的初始样品浓度是准确的，提供了 1–200 ng 的测定范围。

量子位荧光计  

Ex: 480 nm

Em： 530 nm 

规格: 0.2 mL PCR 小瓶

CytoCite 荧光计

Ex: 480 nm

Em： 530 nm

规格: 0.2 mL PCR小瓶

实验方案

概述

1.准备 Helixyte Green ssDNA 工作溶液

2.在每个 0.2 mL PCR 管中加入 190 µL 1X Helixyte Green ssDNA 工作溶液

3.在每个管中加入 10 µL ssDNA 标准品或测试样品

4.在室温下孵育2分钟

5.使用 CytoCite 荧光计或 Qubit 荧光计检测荧光强度

溶液制备F

Helixyte Green ssDNA 工作溶液

使用检测缓冲液（组分 B）将 Helixyte Green ssDNA 试剂（组分 A）稀释 200 倍。 例如，要为 5 个样品制备足够的工作溶液，将 5 μL Helixyte Green ssDNA（组分 A）添加到 1 mL 检测缓冲液（组分 B）中。

注意：通过用箔纸覆盖或将其置于黑暗中来保护工作溶液免受光照。建议在塑料容器而不是玻璃容器中制备溶液，因为染料可能会吸附到玻璃表面。 为获得佳效果，该溶液应在稀释后几小时内使用。

操作步骤 

样品体积的可接受范围是 1~20 μL，这具体取决于核酸样品的估计浓度。

以下实验方案基于 10 µL 样品体积生成，DNA 浓度范围为 20~1000 ng /mL。

1.将 190 µL 1X Helixyte Green ssDNA 工作溶液添加到每个 Cytocite 样品管 (#CCT100) 或等效的 0.2 mL PCR 管中。

注意：使用薄壁、聚丙烯、透明的 0.2 mL PCR 管，例如 AAT Cat#CCT100。

2.在每管中加入 10 µL ssDNA 标准品或测试样品，然后涡旋混合 2~3 秒。

3.在室温下孵育所有管子 2 分钟。

4.将样品插入 CytoCite 或 Qubit 并使用绿色荧光通道检测荧光。

标准校准曲线的制作

1.执行 1:2 连续稀释：将 10 ng/μL ssDNA Standard #2（组分 D）添加到检测缓冲液（组分 B）中，以获得 10、5、2.5、1.25、0.62、0.31、0.15 ng/μL DNA 标准稀释度。

2.在每个管中加入 190 µL Helixyte Green ssDNA 工作溶液。

3.将 10 µL 标准品加入 0.2 mL PCR 管中，然后涡旋混合 2~3 秒。

4.在室温下孵育反应 2 分钟。

5.将样品插入 CytoCite 并使用绿色荧光通道检测荧光强度。

图示