AAT Bioquest:低丰度靶标染色神器----TSA和PSA
今天，要给大家介绍一种用于细胞和组织中低丰度靶标的高分辨率成像技术。TSA/PSA是一种成熟的细胞信号放大技术，当TSA/PSA与我们光稳定性、水溶性的iFluor染料结合后，产生的荧光信号具有比传统组织化学、细胞化学和荧光方法产生的信号更高的检测灵敏度。PSA是美国AAT Bioquest自主研发的与TSA功能类似的信号放大方法，其荧光信号强度比广泛使用的tyramide（TSA）试剂高10-50倍。
TSA/PSA原理
酪胺信号放大（TSA）是一种基于辣根过氧化酶（HRP）的催化活性对靶蛋白或核酸进行高密度原位标记的酶学检测方法。原理为酪胺Tyramide的过氧化物酶反应（已标记荧光的酪胺在HRP催化H₂O₂下形成共价键结合位点）产生的大量酶促产物与目标蛋白的酪氨酸残基共价结合，从而使目标蛋白标记上特异的荧光或生物素。
图1.TSA/PSA原理及工作流程图。相比较于传统ICC和IHC方法的工作流程，TSA/PSA试剂可以通过较简单的步骤实现对所需目标的灵敏检测。
表1.TSA/PSA技术与传统荧光对比
TSA/PSA特点
TSA特点
1.适用广，多色标记
2.多重标记可避免抗体种属交叉问题
3.染色特异性好，信号强度高，适合低丰度靶标
4.石蜡切片样本荧光染色背景干净
PSA特点
1.检测灵敏度提高了100多倍，比标准IHC，ICC，IF方法高出100倍
2.改进的荧光信号比酪胺（TSA）试剂高10至50倍
3.PSA 自由基的更高反应性允许在HRP-靶相互作用位点更快速，有效和更稳定记Styramide缀合物。
4.在不降低灵敏度的情况下，PSA可以使用更少量的抗体/探针
TSA/PSA部分实验结果展示
图2.分别用iFluor 488 PSA和Alexa Fluor 488 TSA染色甲醛固定的石蜡包埋人肺腺癌阳性组织的染色结果图。人肺腺癌阳性组织切片用兔抗EpCam抗体染色，然后用polyHRP标记的山羊抗兔IgG二抗孵育，后使用iFluor 488 PSA （Cat#45020）和Alexa Fluor 488 TSA分别染色。图像显示iFluor 488 PSA与Alexa Fluor 488 TSA相比提高了荧光IHC的灵敏度。
图3.分别用iFluor 488 酪胺和Alexa Fluor 488 酪胺染色甲醛固定的石蜡包埋人肺腺癌阳性组织的染色结果图。人肺腺癌阳性组织切片用兔抗EpCam抗体染色，然后用HRP标记的山羊抗兔IgG二抗孵育。显影：iFluor 488 酪胺（左）；Alexa Fluor 488 酪胺（右）。核染色：DAPI
图4.Styramide 超级信号放大试剂盒的信号强度对比。 （A）将HeLa细胞固定，透化并用各种浓度的兔抗微管蛋白一抗标记，建议的稀释浓度为：1：500。 然后将细胞直接与AlexaFluor488缀合的山羊抗兔IgG二抗染色，后分别与HRP标记的山羊抗兔IgG二抗、AlexaFluor 488酪胺和iFluor 488 Styramide（#45205）染色。 使用FITC滤光片组拍摄荧光图像，并以相同的曝光时间进行分析。 （B）测量相对荧光信号强度，并比较不同检测方法之间的强度。
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