Amplite™人载脂蛋白B（ApoB）试剂盒*针对ALP ELISA开发进行了优化*

用于定量测定血清/血浆样品和细胞培养上清液中的猴载脂蛋白B（apoB）。请注意，洗涤，封闭和孵育缓冲液应包含清洁剂。吐温20，Triton X-100或NP40的使用浓度为0.05-0.5％。在封闭缓冲液和孵育缓冲液中，建议使用0.1％BSA。

血清/血浆样品：为防止不同的LDL粒径干扰，血清/血浆样品应使用Triton X-100处理。用1％Triton X将样品稀释2倍，然后涡旋5秒钟。对于apoB标准品或细胞系产生的样品，不需要Triton X处理。分析人血清/血浆样品时，建议使用Apo ELISA缓冲液稀释样品，标准品和检测抗体。该缓冲液可防止可能由于人血浆和血清中常见的嗜异性抗体的干扰而引起的假阳性读数。Apo ELISA缓冲液已使用来自正常健康人类献血者的血清/血浆进行了验证。请注意，尚未评估来自患有各种**或其他状况的人类受试者的样品中的嗜异性抗体干扰。冻结和解冻血清/血浆会降低这些抗体对apoB的识别。建议将血清/血浆样品稀释5,000x至8,000x。
注意：该试剂盒中未提供Apo ELISA缓冲液。

样品实验方案 

操作步骤

1. 通过添加100μl/孔，用mAb LDL 20/17涂覆高蛋白结合ELISA板，将其在pH 7.4的PBS中稀释至2μg/ ml。在4-8°C下孵育过夜。
2. 用PBS（200μl/孔）洗涤两次。
3. 通过添加200μl/孔的PBS和含有0.1％BSA（孵育缓冲液）的0.05％Tween 20来封闭板。在室温下孵育1小时。
4. 用含有0.05％Tween的PBS洗涤五次。
5. apoB标准品是由50％甘油稳定的纯化LDL。浓度为125μg/ ml。对于测试，请使用标准范围作为指导来准备原液的稀释液。
6. 加入100μl/孔的样品或在血清或血浆样品的孵育缓冲液或Apo ELISA缓冲液中稀释的标准液，并在室温下孵育1-2小时。请注意上述血清/血浆样品的特殊注意事项。 
7. 按照步骤4进行清洗。
8. 在孵育缓冲液或Apo ELISA缓冲液中以100μl/孔的浓度添加1μg/ ml的mAb LDL 11-生物素用于血清/血浆样品。在室温下孵育1小时。
9. 按照步骤4进行清洗。
10. 在孵育缓冲液中以100：1 /孔的比例稀释1：1000的链霉亲和素ALP。在室温下孵育1小时。
11. 按照步骤4进行清洗。
12. 加入100μl/孔的适当底物溶液，例如对pNPP。
13. 在合适的显影时间后，在ELISA酶标仪中测量光密度（对于pNPP为405 nm）

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