Amplite™人载脂蛋白B（ApoB）试剂盒*针对ELISAPro自动ELISA处理进行了优化*

Mabtech的经过仔细验证的ELISAPRO试剂盒提供了所有必需的试剂，以方便，可靠，特异的方式方便地定量测定血清，血浆和细胞培养上清液中的分析物。

ELISAPRO试剂盒随附有预先涂有单克隆抗体（mAb）。样品中的分析物被包被的mAb捕获，并被生物素化的检测mAb和链霉亲和素-HRP（SA-HRP）检测。注：TMB底物的添加将导致底物出现颜色。用硫酸终止反应，并且可以使用ELISA板酶标仪定量光密度。通过与平行分析的ELISA标准品的系列稀释液比较来确定分析物的浓度。

ELISAPRO试剂盒包括Apo ELISA缓冲液，一种可防止假阳性信号的缓冲液。缓冲液可阻止嗜异性抗体交联测定抗体。嗜异性抗体通常存在于人血清/血浆中，也可以存在于其他物种中。缓冲液已使用来自健康人类献血者的血清/血浆样品进行了验证。

1. 酶标仪可在450 nm读取
2. ELISA平板清洗器；自动或手动（例如，多移液管或喷射瓶）、精密移液管，吸头和量筒
3. 用于标准和样品稀释的试管
4. 蒸馏水或去离子水 

Stop溶液0.18 M H2SO4（<1％）对眼睛和皮肤有刺激性，应小心处理。由于不知道暴露的影响，因此应仔细处理该标准。溶液中的缓冲液和试剂含有防腐剂Kathon CG（0.002％），这是一种潜在的过敏原，可能通过皮肤接触引起过敏。人和动物样品应被视为潜在危险的生物材料。所有材料应按照当地法规进行处理。有关更多信息，请查阅我们网站上的《**数据表》。

在开始测定之前，让板和测定试剂达到室温（TMB底物除外，*好使用冷底物）。
计划板布局，使其一式两份，包括标准曲线，样品和测定背景对照。每孔的体积不应超过100μl。

样品实验方案

储备溶液配制

将50 ml洗涤缓冲液浓缩液添加到950 ml蒸馏水或去离子水中（足以完成1个板的所有洗涤步骤）。如果在20倍浓缩物中形成了晶体，则将其升至室温并轻轻混合以溶解。

用蒸馏水或去离子水将Apo ELISA缓冲液浓缩液稀释5倍，以制备所需体积的Apo ELISA缓冲液。对于每个板，将30 ml Apo ELISA缓冲液浓缩液添加到120 ml水中。

所有样品均应在Apo ELISA缓冲液中稀释至少2倍。除去可见的沉淀物并在聚丙烯管/板中稀释，应在样品之前添加缓冲液。高度溶血和高血脂的样品可能会导致定量结果不准确。为防止不同的LDL粒径干扰，所有血清/血浆来源的样品均应在Triton X-100缓冲液中稀释2倍，然后涡旋振荡5秒钟。Triton X稀释对于细胞系产生的样品不是必需的，并且不会干扰其他载脂蛋白的分析。避免冻融循环，因为它会导致信号降低。

根据对空腹健康受试者的反复分析，我们建议稀释系数为5000X。**的移液非常重要，在稀释步骤之间更换吸头，并使用新鲜制成的稀释液。试剂的数量足以重复使用。

apoB标准品是由50％甘油稳定的纯化LDL。浓度为125μg/ ml。无需分装标准液，因为高含量的甘油可使标准液保持液态。储存在-20°C。

如图所示，稀释标准储备溶液以创建标准曲线。试剂的数量足以重复使用。*后一个样品瓶用作测定背景对照，即应省略标准液。在使用30分钟内准备标准曲线。

1. 用洗涤缓冲液（300μl/孔）洗涤板5次。*后一次洗涤后，将其倒置并用吸水纸吸水。然后立即进行下一步。
2. 添加样品（至少稀释2倍），标准液和测定背景对照（100μl/孔）。敲击板混合。用粘性板盖覆盖板，并在室温下孵育2小时。
3. 如上所述清洗板。
4. 添加检测抗体（100ul/孔）。盖好板并在室温下孵育1小时。
5. 如上所述清洗板。
6. 加入抗生蛋白链菌素-HRP（100μl/孔）。盖好板并在室温下孵育1小时。
7. 如上所述清洗板。
8. 添加TMB底物（100ul/孔）。在避开直射光的室温下孵育15分钟。
9. 如上所述清洗板。
10. 在15分钟内测量450 nm处的吸光度。如果可能，请使用能够减去570至650 nm参考波长的酶标仪。 

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