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单核细胞分离技术

（一）铁粉吸附法

1．材料及试剂

（1）铁粉或羰基铁粉（Atomergic chemetals）99％的纯度，颗粒小于60µm（Goodfellow Metals）。

（2）强磁铁（马蹄形）。

（3）一块小棒状磁铁（约1cm长）。

（4）毛细吸管等。

2．操作方法

（1）称取一定量的铁粉，一般为10g，用100ml生理盐水洗涤4次，去除任何可溶性有毒物质。在倒去盐水时，用强磁铁吸住铁粉。

（2）用50ml生理盐水混悬铁粉。摇匀后，分装于10个瓶中，包扎瓶口，121℃**20min，拿出后立即轻轻摇匀，防止铁粉结块，储藏备用。

（3）临用前，倒去瓶中的生理盐水，加入适量的单个核细胞悬液（3ml～5ml，细胞总数为8×10⁷个／瓶）。37℃温育45min，中间不时晃动，使铁粉悬浮起来。

（4）加入一块小磁铁棒于瓶中，让其吸住铁粉以及附着在铁粉上的细胞。

（5）倒出悬液，此悬液主要是**细胞，离心，收集。

（6）在铁粉瓶内倒入一定量的Hank’s液，用力振摇后，以强磁铁吸附，几分钟后，倒出液体。

（7）2 000r/min离心液体，管底即为单核细胞。

（二）玻璃板吸附法

将分离的单个核细胞倾于无菌洁净的玻璃平皿内，置37℃ 30 min～40min，用毛细吸管轻轻吸取悬液，即为**细胞。用适量的Hank’s液冲洗平皿，收获即为单核细胞悬液。

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