QK–Fusion® 重组酶快速基因克隆系统
Producted by Bio-Swamp Life Science
For life science research only.
Not for use in diagnostic procedures.
1. 简介：
QK-Fusion®是本公司新开发的一套快速基因克隆系统。其可以有效的避免传统基因克隆过程中所需要面对的限制性内切酶的选择、酶切效率以及连接效率等问题。无需连接酶，一步反应便可将所需的基因片段克隆到任何线性化的载体上。**内可完成从基因扩增到转化的整个过程。克隆的阳性率>99%。 同时，其还能够完成一个反应克隆多个片段到质粒指定位置的优点。可为研究者节省大量实验成本以及时间成本。其流程如下：
**步：将所需的载体线性化
**步：设计目的基因的特异引物，将引物的5’端延长至少15bp，并保证所延长的序列能够与线性化载体的两端相配对。
第三步：扩增目的基因
第四步：回收纯化目的基因片段
第五步：将回收的基因片段，线性化的载体以及QK-Fusion®重组酶按照比例混合。
第六步：孵育
第七步：转化
2. 实验步骤：
A． A. 的线性化
载体的线性化可以通过酶切（单酶切或双酶切）或者PCR扩增获得。如果使用酶切处理，须尽量保证酶切完全。通常情况下，双酶切效率大于单酶切。不完全的酶切可能造成转化后产生空载体现象。
B. 目的基因引物的设计
引物的设计遵循一般引物的设计原则。**的不同是，须在两条引物的5’端延伸至少15bp，并且所延伸的序列必须能够和线性化载体两端的序列完全配对。如果使用酶切的方法获得线性化载体，那么酶切后产生的粘性末端也包括在这15bp内。本方法也可同时克隆多条片段，但须注意每条片段彼此之间也须保证有至少15bp的重复序列。具体例子见下图：
C．同源重组反应体系：
组份
剂量
线性化的载体片段(2.5ng-25ng/μl)
4μl＊
待插入的目的基因片段(20ng/μl)
1μl＊
QK-Fusion重组酶
15μl
＊理论上,保持所有DNA片段的比例大致为1。通常6Kb的DNA片段需要10-100ng。如果连接更大的片段，需要增加DNA的量。
D． 反应条件：
37 ℃，15 min; 50 ℃, 6 min; 54 ℃, 6 min; 56 ℃, 6 min; 58 ℃, 6 min; 60 ℃, 6 min。保持10 ℃。
E． 转化
取5-10μl 反应产物，并加入感受态细胞中。后续操作步骤遵循感受态细胞的相关说明。
3. 保存
QK-Fusion®重组酶可在-20 ℃下保存一年。
感谢您对我们公司的支持与信任！
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如有任何实验相关的问题，请致邮：qk_fusion@163.com。
我们会**时间协助解决，期待尽快与您展开合作！
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