基因克隆实验常见问题解答：
1. 通过QK-Fusion ® 试剂盒*大可以连接多大的片段？
本试剂盒可以连接各种长度的片段，但是受限制于载体的*大容量。如果插入片段后，载体的总长度过大，则很难得到克隆。
2. *多可以连接多少个片段？怎么设计引物？
本试剂盒可以一个反应连接多个片段，但是载体加上所有插入片段的总长度不能超过载体的*大容量。
如果插入一个片段一样，当需要插入多个片段时，相邻的插入片段之间也需要保持至少15bp的同源臂以完成连接。
3. 为什么出现假阳性克隆（出现空载体克隆）？
本试剂盒不依赖于连接酶，因此无法将已线性化的载体重新成环。因此，当出现假阳性克隆时，说明载体的线性化不完全。建议重新改变条件并将载体线性化完全。
4. 为什么没有长出克隆？
如果转化后平板没有长出菌落，说明克隆没有成功。其可能原因如下：a. 引物序列设计错误；b. 线性化载体或插入片段的浓度过低；c. 转化时，加入过多融合反应液；d. 感受态效率太低。
5. 插入片段出现突变
本试剂盒只能起到连接的作用，并不会改变DNA序列。因此，如果出现突变，说明PCR反应的保真性不够，建议改变条件并重新扩增。