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武汉华联科生物技术有限公司
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蛋白质组学:蛋白表达与纯化实验技术服务
步骤1. 目标基因全基因合成:
1. 从基因库中搜索目标蛋白的cDNA序列。如果我们的cDNA文库中有这个基因,我们免费供应给客户。
实验技术服务
2. 根据选用的表达系统对cDNA进行密码子优化,密码子优化。
3. 合成设计好的基因序列。
步骤2. 目标基因亚克隆:
1. 扩增并抽提含有目标基因的载体质粒。
2. 将目标基因亚克隆到合适的表达质粒上。
实验技术服务
3. 测序验证构建质粒的准确性。
4. 供应如下表达载体:供应给客户:正确构建的重组表达质粒,含重组质粒的DH5α菌株及测序报告。
步骤3. E. coli表达菌株转化及筛选:
1. 扩增并抽提构建好的表达质粒。
2. 将表达质粒转化到高效的E.Coli表达菌株中。
实验技术服务
3. 至少挑选5个阳性克隆于LB培养基中扩增并诱导表达目标蛋白。
4. SDS-PAGE电泳检测培养后中目标蛋白的表达情况,并挑选合适的单克隆菌株用于目标蛋白的表达。
实验技术服务
5. 可供应表达菌株:DH5α, Top10, JM115, BL21 (DE3), BL21 (DE3) pLys, XL1 Blue, XL10 Golden, Rosetta-gami。
供应给客户:重组质粒的表达菌株及表达检测报告。
步骤4. 目标蛋白表达及纯化:
1. 摇瓶培养1L重组**,诱导表达目标蛋白。
2. 通过亲和,离子交换,疏水及凝胶过滤等多种层析方法纯化表达的重组蛋白。
3. 利用蛋白酶去除不需要的纯化标签,再纯化获得所需的目标蛋白(可选,构建表达载体时需加入合适的蛋白酶切位点)。
4. 通过SDS-PAGE电泳检测每步结果并控制*终产品质量。
5. 通过Western-blot验证目标蛋白正确性。
尊敬的客户:
您好,我司是一支技术力量雄厚的高素质的开发群体,为广大用户供应高品质产品、完整的解决方案和上等的技术服务公司。主要产品有
酶联**ELISA
、
实时荧光定量PCR
、
论文服务
等。
本企业坚持以诚信立业、以品质守业、以进取兴业的宗旨,以更坚定的步伐不断攀登新的高峰,为民族自动化行业作出贡献,欢迎新老顾客放心选购自己心仪的产品。我们将竭诚为您服务!
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