未检测到目得蛋白或蛋白很少:
可能原因
处理方法
样品被蛋白酶降解
添加蛋白酶抑制剂;所有操作保持4℃以下冰上操作并防止冻融
抗体浓度太低
调整IP和/或IB抗体浓度, 必要时设立浓度梯度,摸索*佳浓度
抗抗体亲合力太低
选用适合于IP和/或IB的相应抗体
IP抗体未与agarose珠子结合
选用适合于IP的相应珠子, 正确保存防止变质或干燥
Tag未暴露在融合蛋白构象的表面
改变tag融合表达部位
裂解液严谨度太高
改用低严谨度裂解液
目得蛋白高背景:
非特异蛋白结合
在无血清培养液中裂解细胞; 在**沉淀前用protein (G/A)珠子预洗**沉淀后增加漂洗次数和严谨度(高盐或去垢剂)
裂解液严谨度太低
改用高严谨度裂解液
实验仪器或液体被污染
使用洁净的仪器或液体
转移膜上的非特异吸附
戴手套, 用镊子夹取, 不要接触膜转移面
疫共沉淀(Co-Immunoprecipitation)是以抗体和抗原之间的专一性作用为基础的用于研究蛋白质相互作用的经典方法。是确定两种蛋白质在完整细胞内生理性相互作用的有效方法。本公司由海外华侨和多名海归博士组成的技术团队,主要致力于**学、分子生物学、病理学、代谢组学、生物化学技术在科研中的应用与推广,专业从事医学科研课题外包,项目申请、组织实施、检查评估、验收鉴定等服务。有着十分丰富的科研经验和实战技术,所以值得选择,以上信息仅供参考,详情请致电相关工作人员为您解答。
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