显色是ELISA中的*后一步温育反应,此时酶催化无色的底物生成有色的产物。反应的温度和时间仍是影响显色的因素。在一定时间内,阴性孔可保持无色,而阳性孔则随时间的延长而呈色加强。适当提高温度有助于加速显色进行。在定量测定中,加入底物后的反应温度和时间应按规定力求准确。定性测定的显色可在室温进行,时间一般不需要严格控制,有时可根据阳性对照孔和阴性对照孔的显**况适当缩短或延长反应时间,及时判断。 OPD底物显色一般在室外温或37℃反应20-30分钟后即不再加深,再延长反应时间,可使本底值增高。OPD底物液受光照会自行变色,显色反应应避光进行,显色反应结束时加入终止液终止反应。OPD产物用硫酸终止后,显色由橙黄色转向棕黄色。 TMB受光照的影响不大,可在室温中置于操作台上,边反应观察结果。但为保证实验结果的稳定性,宜在规定的适当时间阅读结果。TMB经HRP作用后,约40分钟显色达顶峰,随即逐渐减弱,至2小时后即可完全消退至无色。TMB的终止液有多种,叠氮钠和十二烷基硫酸钠(SDS)等酶抑制剂均可使反应终止。这类终止剂尚能使蓝色维持较长时间(12-24小时)不褪,是目视判断的良好终止剂。此外,各类酸性终止液则会使蓝色转变成黄色,此时可用特定的波长(450nm)测读吸光值。
ELISA即酶联**吸附试验,是一种常用的固相酶**测定方法。Engvall 和Perlmann于1971年*先应用该法进行了IgG定量测定,并命名为"enzyme linked immunosorbent assay (ELISA)"。本公司由海外华侨和多名海归博士组成的技术团队,主要致力于**学、分子生物学、病理学、代谢组学、生物化学技术在科研中的应用与推广,专业从事医学科研课题外包,项目申请、组织实施、检查评估、验收鉴定等服务。有着十分丰富的科研经验和实战技术,所以值得选择,以上信息仅供参考,详情请致电相关工作人员为您解答。
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