一、 取材
1、 快:实验标本在动物麻醉或处死后1~2分钟内取材、固定完毕;临床活检标本力争组织离体后1分钟内固定。固定液为预冷的2.5%缓冲戊二醛固定液。
2、 小:电镜标本的标准大小为1mm3。取材时,可先取稍大组织,经稍许时间的预固定后,再改小。
3、 利:切割组织时,需用锋利的手术刀片、双面刀片划取,避免揉割、牵拉和挤压组织,防止机械损伤。禁止使用剪刀剪切。
4、 净:取材所用器皿,应事先清洗干净并烘干。
5、 冷:取材可在常温下进行。如有条件*好在4℃低温下操作,以减少组织自溶。所用器械、容器及固定液均应预冷。
6、 所取标本做好标记:瓶签上注明组别、编号等。
7、 取材部位应准确:根据观察内容和实验目的,精准取材,如肿瘤取材时,应确保取到肿瘤实质,避免取肿瘤间质或出血、坏死部位。
二、固定
预固定:2.5%缓冲戊二醛固定液,用量应为10~20倍于组织块的体积,4℃固定至少30min以上。
取适量0.1mol/L PBS缓冲液清洗3次,每次10min。
后固定:1%锇酸固定,肾脏固定4min,其他组织固定1h。
科普小常识:
透射电子显微镜(Transmission Electron Microscope,简称TEM),可以看到在光学显微镜下无法看清的小于0.2um的细微结构,这些结构称为亚显微结构或超微结构。要想看清这些结构,就必须选择波长更短的光源,以提高显微镜的分辨率。
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