a.细胞克隆效果测定
细胞选择:Sp20/Ag-14 或P3X63-Ag8.653
Gibco胎牛血清浓度与细胞数:
10%血清/1个细胞/孔
4%血清/5个细胞/孔
细胞培养基RPMI-1640, 96孔培养盘36℃±2℃,5%二氧化碳培养10~15天。试验中选择一个已知参考牛血清作对照。
克隆效率计算:
克隆效率=(阳性孔平均数/ 培养孔总数) X100%
相对克隆效率=待测血清克隆效率/参考血清克隆效率
b.贴壁效率试验:
用人的传代细胞作每批Gibco胎牛血清的贴壁效率试验,A549(人肺癌细胞)该细胞可以反应出低浓度血清的贴壁变化。采用6孔培养盘每批Gibco胎牛血清用两种浓度和两种不同的细胞接种数即10%血清――100细胞/孔,4%血清200介细胞/孔。放36℃±2℃,湿润5%二氧化碳培养箱培养10~14天,计算着色细胞克隆,确定贴壁效率。从这两种不同血清浓度来确立实验血清支持细胞贴壁生长的水平,分析两种试验条件下平均贴壁效率。
贴壁效率(%)=(每孔克隆平均数/ 每孔活存的培养细胞平均数) X100%
相对贴壁效率=被测血清贴壁效率/参考血清贴壁效率
c. 二倍体纤维细胞促生长试验
人二倍体细胞株 WI28 MRc5
25cm2细胞培养瓶,5%血清,每瓶接种1.5X105细胞连传3代,每代Gibco胎牛血清浓度和接种细胞数相同,每代培养7天,每代接种二个细胞瓶,36℃±2℃培养。以同样条件用已知参考血清进行平行培养。每代收获细胞计数,计算每批待检血清与参考Gibco胎牛血清的相对生长率(RGR)。
RGR=(试验血清每瓶细胞平均数/ 参考血清每瓶细胞平均数) X100%
牛血清主要质量要求(Sigma)
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