脂质体Lipofectamine® 2000 转染试剂的使用及保存方法!
①. 脂质体Lipofectamine® 2000 转染试剂:4℃保存和运输
②. Lipo2000的活性:由于Lipo2000是生物蛋白,在4℃保存和运输,所以就算是同一个批号的Lipo2000,只有在刚出厂分装时活性才是相同的。经过供应商的保存、运输(运输的温度控制各不相同),其活性将有细微的变化。
③. Lipo2000的使用及优化:
(1) 由于每一管Lipo2000的活性都不太相同,其实就算是同一管,使用的时间长了,后期的活性跟刚开始用时也不太一样,所以在拿到一管新的Lipo2000时,一定要做一下活性优化;
(2)如果一直使用Lipo2000做实验,优化的步骤可以简化:假设之前转化时每孔一直用4ul Lipo2000,那么优化的步骤可以简化为只用5个孔,每个孔中Lipo2000用量分别为3ul, 3.5ul, 4ul, 4.5ul, 5ul,其他条件不变,看哪个Lipo2000的用量结果*好,接下来的实验就用优化的用量。
④. 使用前将整管的Lipo2000混匀,分装,*好分成100ul/管;实验前,将分装好的100ul Lipo2000和质粒DNA(或RNA)放到实验台上室温平衡,不需要冰上保存;将Opti-MEM培养基放到水浴锅中37℃平衡;按照说明书进行转染,注意控制好每一步操作的时间。
⑤.切记并不是Lipo2000的用量越多越好,实际上,Lipo2000加多了,毒性会增加,细胞会死亡,转化效率会大幅降低。
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