Rhodamine 123 Mitochondrial Membrane Potential Assay Kit 罗丹明123线粒体膜电位检测试剂盒

Rhodamine 123 Mitochondrial Membrane Potential Assay Kit 罗丹明123线粒体膜电位检测试剂盒

产品信息

产品描述

JC-1线粒体膜电位检测试剂盒（JC-1 Mitochondrial Membrane Potential Assay Kit）是一种以JC-1为荧光探针，快速且灵敏的检测细胞、组织或纯化线粒体膜电位变化的试剂盒。因线粒体膜电位的下降是细胞凋亡早期的一个标志性事件。因此本试剂盒可用于早期的细胞凋亡检测。

JC-1 是一种广泛用于检测线粒体膜电位△Ψm位的理想荧光探针。JC-1染料以电势依赖性的方式积聚在线粒体内，可以用来检测细胞、组织或纯化的线粒体膜电位。正常线粒体内，JC-1聚集在线粒体基质中形成聚合物，聚合物发出强烈的红色荧光（Ex=585 nm, Em=590 nm）；不健康的线粒体由于膜电位的下降或丧失，JC-1只能以单体的形式存在于胞浆中，产生绿色荧光（Ex=514 nm, Em=529 nm）。JC-1不仅可用于定性检测，因颜色的变化可以非常直接的反映出线粒体膜电位的变化。也可以用于定量检测，因线粒体的去极化程度可以通过红/绿荧光强度的比例来衡量。

本试剂盒提供CCCP用作线粒体膜电位丧失的阳性对照。对于六孔板样品，本试剂盒可检测100个样品。

产品组份

保存条件:-20℃保存，1年有效。

注意事项

1. JC-1（200×）在4℃、冰浴等较低温度情况下会凝固而粘在离心管管底、管壁或管盖内，可以20～25℃水浴温育片刻至全部融解后使用。
2. 装载完JC-1后用JC-1染色缓冲液（1×）洗涤时，使JC-1染色缓冲液（1×）保持4℃左右，此时洗涤效果较好。
3. JC-1探针装载完并洗涤后尽量在30min内完成后续检测。在检测前需冰浴保存。
4. 请勿把JC-1染色缓冲液（5×）全部配制成JC-1染色缓冲液（1×），本试剂盒使用过程中需直接使用JC-1染色缓冲液（5×）。
5. 如果发现JC-1染色缓冲液（5×）中有沉淀，必须全部溶解后才能使用，可在37℃加热促进溶解。
6. CCCP为线粒体电子传递链抑制剂，有毒，请注意小心防护。
7. 为了您的an全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用方法

1. JC-1染色工作液制备
2. JC-1 染色工作液的量为1ml，其他培养器皿的JC-1 染色工作液的用量以此类推；对于细胞悬液每50～100万细胞需0.5mL JC-1 染色工作液。
3. JC-1（200×），按照每50μL JC-1（200×）加入8mL 超纯水的比例稀释JC-1。剧烈震荡充分溶解并混匀JC-1。然后再加入2mL JC-1 染色缓冲液（5×），混匀后即为JC-1染色工作液。
4. JC-1（200×）用超纯水（试剂盒提供）充分溶解混匀后，才可加入JC-1染色缓冲液（5×）。不可先配制JC-1染色缓冲液（1×）再加入JC-1（200×），这样JC-1会很难充分溶解，会严重影响后续的检测。
5. 阳性对照的设置
6. （10mM）推荐按1∶1000 的比例加入到细胞培养液中，稀释至10μM，处理细胞20min。随后按照下述方法装载JC-1，进行线粒体膜电位的检测。
7. 10μM CCCP处理20 min后线粒体的膜电位会完全丧失，JC-1 染色后观察应呈绿色荧光；而正常的细胞经JC-1 染色后应显示红色荧光。对于特定的细胞，CCCP 的作用浓度和作用时间可能有所不同，需自行参考相关文献资料决定。