TRITC Phalloidin 罗丹明标记鬼笔环肽

TRITC Phalloidin 罗丹明标记鬼笔环肽

产品简介：
  

分子式（Molecular Formula）：C60H70N12O13S2
分子量（Molecular Weight）：1231.4
*大激发/发射波长（Ex/Em）：540～546/565～575nm
外观（Appearance）：紫色粉末（冻干粉）
溶解性（Solubility）：溶于DMSO、DMF、甲醇或者乙腈水溶液（20%）

      鬼笔环肽( Phalloidin) ,又称鬼笔鹅育素*初是以毒蘑菇鬼笔鹅育( Amanita phalloides) 中分离到的一种七肽**，以极高的亲和力和特异性结合肌动蛋白丝F-ctin(聚合开式的肌动蛋白) ,不会结合单体肌动蛋白( G-actin)。不像肌动蛋白抗体，同时识别单体和聚合开式的肌动蛋白。鬼笔环肽对大小纤维的亲和力相近，在许多不同的动植物物种的肌肉和非肌肉细胞中，基本都按照一个肌动蛋白亚基与一个鬼笔环肽分子的化学计量比结合。不像肌动蛋白抗体,对不同物种或来源的肌动蛋白亲和力会发生明显变化。鬼笔环肽的非特异性结合几乎可忽略染色和未染色的区域的差异极其明显。鬼笔环肽使得肌动蛋白聚合/解离的临界浓度降至1ug/ml ，可用作一种聚合增强剂。另外产生的复合物高度稳定( 解离常数约3x 10-8M) ，能够抑制细胞松弛素碘化钾和温度上升引起的去聚合和去组装舌性。
     鬼笔环肽及其行生物在纳摩尔浓度即可对F-actin染色且水溶性良好是非常实用和方便的探针,对组织切片、细胞培养物或无细胞体系内的F-actin进行定性和定量研究。另外鬼笔环肽及其行生物很小直径约12-15 A ，分子量<2000 Da ，经标记后的F-actin仍维持许多标记前的功能。比如标记的甘油抽提肌纤维仍能收缩;标记的肌动蛋白丝仍能在固相肌球蛋白基质中移动。
      本品为TRITC荧光标记的鬼笔环肽(TRITC-Phallidin) ,冻干粉形式提供，可直接溶于甲醇或DMSO配置成适当浓度的储存液。之后用PBS或PBS+1% BSA稀释到合适的工作浓度。常用工作浓度范围 80-200r M。
  产品应用

  1) 对固定的组织切片和组织细胞培养物进行肌动蛋白丝(F-actin )的荧光染色;

  2) 体外制备稳定的荧光肌动蛋白丝( F-actin );

  [注2] :染色工作液现配现用室温避光保存。

  二、染色流程
  2.1细胞爬片培养,使其密度至少达半汇合。
  2.2 吸掉培养液用37C预热的1xPBS Buffer (pH 7.4 )清洗细胞2 次。
  2.3 用溶于PBS的4%多聚甲醛固定细胞室温固定10min。[注意] :固定过程中甲醇能破坏肌动蛋白，因此固定液中*好避免接触任何甲醇。*好的固定液是无甲醇的甲醛。
  2.4 用1x PBS Buffer清洗细胞2-3 次,室温下30S/ 次。

  2.5 用破膜缓冲液透化细胞室温处理5min。
  2.6 用1x PBS Buffer清先细胞2-3.次室温下30S/次。
  2.7 取200UI现配的TRITC-Phallodin染色工作液,完全要盖盖玻片上的细胞窒温避光孵育30min。[注意] :通常情况49C-370C都适合用于染色。为了避免工作液的挥发孵���过程将盖玻片置于一密封的容器内。
  2.8 用1> PBS Buffer清先细胞2-3 次,室温下30S/ 次。
  2.9 取200ul DAPI 溶液(100nM )或商业化的即用型DAPI染色液对细胞核复染室温约30S。

  2.10 用1x PBS Buffer清先细胞1-2 次室温下30S/次。
  2.11将盖玻片倒置在滴有一滴抗荧光淬灭剂(如Fluoromount-GTM ,Cat# FSM0032-5ML)的裁玻片上。用纸巾轻轻吸掉多余淬灭剂,然后用透明指甲油密封盖玻片四周。将此去劫处理玻片置于4.C避光存放至少6个月仍能维持F-actin染色。
  [可选] :完成步骤3.8后直接将盖玻片倒置在含DAPI的抗荧光淬灭剂( 如DAPIFluoromount-GTM Cat# FSM0033-5ML) 的载玻片上。然后吸掉多余淬灭剂并用指甲油密封盖玻片四周
  2.12 荧光显微镜下观察染色结果选择TRITC激发/发射滤片(Ex/Em= :546/575nm) 和DAPI激发/发射滤片(Ex/Em= 364/454nm)。

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