SPE固相萃取技术以及固相萃取仪器装置调试

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固相萃取的五个步骤

固相萃取过程要求样品以溶液形式存在，没有干扰，而且有足够的浓度以被检测。固相萃取的发展过程分为五步：

**步 选择萃取管

1.正相柱、反相柱、吸附柱：样品质量不超过填料质量的5%。

2.LC-SAX和LC-SCX柱：其吸附剂容量为0.2毫当量/克（1毫当量=1毫摩尔的[+1]或[-1]带电荷物质）。

3.LC-NH2和LC-WCX柱：离子交换容量由应用决定。

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**步 预处理萃取管

反相类型硅胶和非极性吸附剂介质，通常用水溶性有机溶剂，如甲醇，预处理。甲醇湿润吸附剂表面和渗透键合烷基相，以允许更有效地润湿硅胶表面。这些溶剂通常与洗脱剂一样是用于消除固相萃取管上的杂质对分析物的干扰，

正相类型固相萃取硅胶和极性吸附剂介质通常用样品所在的有机溶剂来预处理。离子交换填料:对于非极性有机溶剂中的样品，用样品溶剂来预处理。对极性溶剂中的样品，用水溶性有机溶剂来预处理。为了使固相萃取填料从预处理到样品加入时都保持润湿，允许大约1ml的预处理溶剂在管过滤片上。

第三步 加入样品当过量体积的水溶液被萃取时，反相硅胶填料渐渐减少预处理时所获得的溶剂化层。这就会降低萃取效率和样品的回收率。如果回收率较低或重现性不好，可能是分析物流失。为使适当的化合物保留在填料上，洗脱或沉淀不要化合物，要调节pH、盐的浓度和样品溶液在有机相中的含量。为了避免堵塞固相萃取管的过滤片，如果可能，在萃取之前预先过滤或离心样品。流速会影响某些化台物的保留。一般来说，对于离子交换固相萃取管，流速小应大于2ml／min；对于其它上的固相萃取管，流速不应大于5ml／min；如果时间不是一个确定因素的话，滴速*佳。

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第四步 冲洗填料若分析物被保留在填料上，用一种不能洗脱所要化合物的溶液，去冲洗掉不要的物质。冲洗液不超过一个管体积。为消除不要的、可能保留很弱的物质，用比样品基质强，但其强度又不至于洗脱分析物的的溶剂去冲洗填料。典型的溶液可含有比*后洗液少一点的有机或无机盐，也可以调节不同的pH。与*后洗脱液完全不同极性的纯溶剂或溶剂混合物可为有用的洗脱液

如果选用分析物不被保留在填料上的方案，则应用相当于一管体积的样品溶剂去洗脱管上的分析物。在这种情况下，冲洗是作为洗脱来完成萃取过程。

第五步 洗脱感兴趣的化合物用少量能洗脱分析物的溶液去冲洗填料（一般2ml-200 ml，取决于管的大小）用两次少量液体洗脱分析物比用一次大体积更有效，当洗脱液停留在填料上为20秒到1分钟时，分析物的回收率*好。这一步滴速是*有利的。

· 对于反相、正相和离子交换过程，一般五步全都需要进行；

· 对于样品净化过程，只需要前三步，并且在第三步，分析物将随着样品从管内流出而收集，干扰杂质保留在吸附剂上。

样品的前处理

除了保证样品适当的pH值，您还应该考虑其它样品前处理的需要。以下部份描述了在使用固相萃取装置之前某些很难的样品应该怎样进行前处理。

土壤和沉积物:土壤和沉积物一般用中等极性到非极性溶剂通过索氏萃取或超声波处理萃取。萃取物使用正相萃取除去干扰物，再溶解在另一种溶剂之中。如果所分析化合物的萃取取决于PH，土壤和沉积物样品在萃取和固相萃取净化之前，要将其均匀化。

植物组织、水果、蔬菜和谷类:植物组织、水果、蔬菜和农产品（如动物的食物及谷类），要用水、极性溶剂（如甲醇，乙氰）或水及这些溶剂的混合物来均匀化，用反相及离子交换使之净化。通过离心或过滤除去沉淀的蛋白质和固体后，样品的pH可能需要调节。样品也可能用中等极性到非极性溶剂均匀化，以用于正相固相萃取。同样，在用于固相萃取之前，样品可能需要离心或过滤。

食用肉类、鱼类和动物组织:食用肉类、鱼类和其它的动物组织要在水中均匀化，如用于反相和离子交换的样品，可能需要用酸（一般为盐酸或三卤乙酸）水解或降解食用肉类及组织、或者用碱（如氢氧化钠）皂化。样品接着可离心，取上层溶液用于正相固相萃取。

药片和其它药用固体样品:药片和其它药用固体样品应粉碎成细粉状，然后用水或适当的缓冲溶液萃取或均匀化，使用反相或离子交换固相萃取。中等极性到非极性溶剂用于正相净化过程

血清、血浆、血液：血清和血浆样品不需要前处理即可用于固相萃取。然而，在很多情况下，分析物（如**）可能结合在蛋白质上，它会降低固相萃取的回收率。为了破坏生物体液内蛋白质的键合，在反相或离子交换萃取过程中，可选用以下方法之一：

    · 用0.1Ｍ或更大浓度碱或酸调节pH至极限值（pH<３或pH>９）。用上层溶液做样品进行固相萃取。

    · 用极性溶剂如乙氰、甲醇或丙酮沉淀蛋自质（通常用两份溶剂/一份生物体液），混合均匀和离心之后，移取上层溶液，用水或缓冲溶液稀释即可用于固相萃取。

    · 为沉淀蛋白质，用酸或无机盐如甲酸、高卤酸、三卤乙酸、硫酸氨、硫酸钠或硫酸锌来处理生物体液。在用于固相萃取之前，上层溶液的pＨ可能需要调节。

· 生物体液超声波处理15分钟，加入水和缓冲溶液，离心，上层溶液用于固相萃取。

尿：对于反相或离了交换固相萃苯取，尿样品不需要前处理，但样品加入前，经常需用水或有适当pH的缓冲溶液稀释。但某些情况下，酸水解（对碱性化合物）或碱水解（对酸性化合物）用来保证所分析的化合物在尿样品中自由溶剂化。通常将一个强酸（如浓盐酸）或碱（如10Ｍ氢氧化钾）加入尿中。加热尿样15-20分钟，然后冷却，用缓冲液稀释，调至适当的pH 即可用于固相萃取。也可用酶水解来释放被结合的化合物或**。

细胞培养介质：细胞培养介质不用处理即刻使用。某些方法可能需要用水或有适当pH的缓冲溶液稀释其介质，以保证分析物在样品中自由溶剂化。如果细胞培养介质含有满载颗粒，是很难通过固相萃取装置。在用于固相萃取之前，它可能需要摇动和离心。大部分细胞培养介质的固相萃取使用反相和离子交换方法。

牛奶：一般牛奶使用反相和离子交换固相萃取条件。样品可能要用水和水/极性溶剂混合物（如甲醇，大约至50%）稀释。某些过程需要用酸处理来沉淀蛋白质（典型的盐酸、硫酸、三卤乙酸）。沉淀以后，样品要离心，上层溶液即用于固相萃取。

水样品：饮用水、地下水及污水只要不含大量固体颗粒，可直接用于同相萃取。地下水及污水在使用固相萃取之前可能需要过滤，如果所分析的化合物被结合在被遗弃的颗粒上，过滤会降低其回收率。如有可能尽量不过滤样品，让未过滤样品直接通过固相萃取装置，在洗脱过程中，让溶剂通过在吸附剂之上的颗粒，这将提高回收率。因为用这种方法，被结合在颗粒上的要分析化合物将得到回收。在很多情况下，水样品使用反相或离子交换固相萃取。

酒、啤酒、液体饮料:在反相或离了交换条件下，液体和酒精饮料不用处理就可用于固相萃取。对反相萃取，如酒精含量很高，需要用水或缓冲溶液稀释到酒精含量小于10%；如果有固体在样品之中，在用于固相萃取之前，有必要离心或过滤样品。

水果汁:水果汁一般不用前处理或离心既可用于固相萃取。如果离心，上层溶液用于固相萃取。粘性果汁可能需要用水或有适当pH的缓冲溶液来稀释。

药用液体样品:因为液体药品主要是水溶液，这类样品使用反相或离子交换固相萃取。如果样品具有粘性，必须用水或有适当的缓冲溶液来稀释。样品的有机萃取物可能要用正相固相萃取。

油类:碳氢或脂肪油通常是在正相萃取条件下分析的，因为它们不能用水稀释。稀释溶剂常选用中等极性到非极性溶剂，如正己烷和卤化剂。稀释的样品通过正相键合硅胶或吸附剂，样品在通过时被收集。所分析的化合物通过而不被保留，杂质则被保留在吸附剂上。如果分析物被保留在填料之上，不断地用增加溶剂的极性或用极性稀释混合物冲洗固相萃取填料，直到分析物回收到某**份之中。为收集水样品中的油，使用反相同相萃取。