多克隆抗体制备技术服务|实验技术服务

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多克隆抗体制备技术服务|实验技术服务——pCzn1质粒+Arctic Express宿主菌低温表达体系。
我们具备丰富的蛋白表达设计经验及实验操作技巧，承诺客户不成功不收费。我们所有的实验数据真实可信，我们提供原始的表达菌株和克隆质粒，客户可以依据我们的实验报告重复我们的实验结果。
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测序实验流程：
血清的分离：
如果用三角瓶或平皿盛血，将器皿倾斜放置于37oC烘箱2hr，转移到4oC沉淀，**天早上用吸管吸取血清。如果用离心管收集，37oC烘箱放置2hr，转移到4oC沉淀，**天早上离心，10000RCF，10分钟。在血清中加入 NaN3 至终浓度0.02%，分装后-20oC保存。
抗血清收获后，加 1/万硫柳汞或 1/万的叠氮钠防腐，或加入等量的中性甘油，分装小瓶，置-20℃以下的低温保存，数月至数年内抗体效价无明显变化。注意避免反复冻融。也可将抗血清冷冻干燥后保存。
多克隆抗体的制备一般包括以下几个步骤:
1、制备抗原。
2、选择实验动物。
3、动物免疫。
4、试取血进行测试，看看是否成功免疫。
5、如果成功免疫，杀死实验动物，采集全部血清。
6、纯化出抗体。
7、鉴定抗体。包括纯度以及特异性。
(一)抗原制备
Ig 是免疫球蛋白，对异种动物而言，是良好的抗原物质。可以刺激异种动物产生抗 Ig 血清，
经适当提取后，产生抗 Ig 抗体，又叫**抗体或抗抗体。在多数的间接标记反应中，均需制备
抗 Ig 抗体。
(二)材料与试剂
1.提取的动物 Ig
2.弗氏完全佐剂和弗氏不完全佐剂
3.青霉素和链霉素
4.实验动物 兔
5.其它材料及试剂
时间（天）    制备步骤    说明
1    初次免疫    每种抗原免疫5只Balb/c小鼠，抗原与弗氏完全佐剂
14    **次免疫    抗原与水溶性佐剂
21    第三次免疫    抗原与水溶性佐剂
28    血清效价检测    间接ELISA检测血清效价，效价达>1：20000；抗血清效价>1:10000再次加强一次，效价<1:10000终止合同
30    加强免疫    单独抗原 
三天后采血(血清做阳性对照)，取脾
34    细胞融合    SP2/0骨髓瘤细胞与一只小鼠（ELISA效价较高）的脾细胞融合
44-56    HAT选择杂交瘤细胞    ELISA效价检测筛选阳性细胞克隆（一株）
60-70    细胞上清送检    2ml ELISA阳性细胞上清交客户检测，请在接到样品后1周之内回复
     细胞冻存    待客户检测结果结束，确认1株细胞株进行后续的腹水制备
     制备腹水并纯化    接种细胞制备腹水及腹水纯化（1株）
     *终提供    •2株杂交瘤细胞，T-25细胞培养瓶1瓶
•1株细胞Protein A/G纯化抗体2mg
•完整的技术服务报告
•抗体验收标准：免疫原检测抗体效价 >1:50000