内皮细胞培养|实验技术服务

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内皮细胞培养|实验技术服务——pCzn1质粒+Arctic Express宿主菌低温表达体系。
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测序实验流程：
1.干粉培养基原倍液的配制
1）配制过滤除菌的细胞培养基
①阅读培养基使用说明，确定需要添加何种添加剂（如NaHCO3、L-谷氨酰胺、丙酮酸钠、HEPES等）。
②根据所需将培养基全部倒入一容器中，用少量注射用水（20℃～30℃）将袋内残留培养基洗下整理并入容器。加注射用水至总体积的95%，轻微搅拌溶解。
③加入规定量的碳酸氢钠及所要添加的物质。
④轻微搅拌溶解，加注射用水至规定体积。
⑤用1mol/L氢氧化钠溶液或1mol/L盐酸溶液调pH至所需值。
⑥用0.22μm滤膜正压过滤除菌。
⑦溶液应在2℃～8℃下避光保存。
2.配制可高压灭菌细胞培养基
①根据所需将培养基全部倒入一容器中，用少量注射用水（20℃～30℃）将袋内残留培养基洗下，并入容器。加注射用水至总体积的95%，轻微搅拌溶解。
②在121℃、15psi下灭菌15分钟。
③待溶液冷却至室温，加入无菌0.2mol/LL-谷氨酰胺溶液规定体积、无菌7.5%（w/v）碳酸氢钠溶液规定体积，加注射用水（20℃～30℃）至规定体积，混匀。
④如果必要，用1mol/L氢氧化钠溶液或1mol/L盐酸溶液调pH至所需值。
⑤溶液应在2℃～8℃下避光保存。