补体溶血活性是血浆或血清中补体的经典和替代途径的功能测试。经典途径方法 (CH50) 基于在 Ca++ 和 Mg++ 存在下裂解致敏的绵羊红细胞。当怀疑补体缺失或缺乏时,它作为筛查试验是有帮助的。该测试对通路任何组成部分的减少、缺失和/或不活跃敏感。
该方法也适用于评估药物对补体成分抑制或消耗的影响。此外,根据国际标准 ISO 10993-4:2017,可以评估生物材料和医疗器械在血液、血浆或血清与生物材料接触后的血液相容性。生物材料或药物激活补体系统会导致补体蛋白的消耗,从而降低 CH50 水平。
应用
测量经典途径补体活性。可以分析来自以下物种的血浆或血清样品:人、豚鼠、仓鼠、大鼠、兔、牛、猪、恒河猴和比格犬。该试剂盒仅供实验室研究使用,不可用于诊断或治疗程序。
原则
将红细胞悬液与连续稀释的血清或血浆在 37 ºC 下孵育 30 分钟。补体系统的激活将导致溶血。孵育后,将样品离心以获得上清液。上清液中的游离血红蛋白浓度与补体活性成正比,通过分光光度计在 415 nm 波长下测量。绘制血浆稀释因子与溶血程度的关系图可以计算 CH50(即稀释血清以获得 50% 的红细胞裂解)。
阳性参考是裂解液诱导的完全裂解,阴性参考是与稀释缓冲液孵育后获得的。
该试剂盒旨在通过小样品 (25 μL) 的经典途径测定补体活性,并且可以在 96 孔(圆底)微孔板中进行。该测定也可以在微量离心管中进行。
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