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奥林巴斯荧光显微镜的原理
荧光显微镜是用来观察研究样品荧光现象的光学显微镜,目前主要用落射照明技术,由光源、滤片系统、光路系统等组成。
荧光光源——般采用超高压汞灯(50一200W)或者高功率LED光源,它可发出各种波长的光,但每种荧光物质都有一个产生*强荧光的激发光波长,所以需加用激发滤片(一般有紫外、紫色、蓝色和绿色激发滤片),仅使一定波长的激发光透过照射到标本上,而将其他光都吸收掉。每种物质被激发光照射后,在极短时间内发射出较照射波长更长的可见荧光。荧光具有专一性,一般都比激发光弱,为能观察到专一的荧光,在物镜后面需加阻断(或压制)滤光片。它的作用有二:一是吸收和阻挡激发光进入目镜、以免于扰荧光和损伤眼睛,二是选择并让特异的荧光透过,表现出专一的荧光色彩。两种滤光片必须选择配合使用。滤片系统是荧光显微镜的重要组成部分,由激发滤片、二向色性滤光片、发射滤片组成。激发滤片位于光源和标本之间,允许特定波长范围的光通过,作为样品的激发光。发射滤片位于物镜和目镜之间,允许标本发射的荧光通过,以获得清晰的图像。二向色性滤光片在激发滤片和发射滤片之间,是一种入射角为45º的干涉滤光片,它可以反射一定波长的光同时透过另外波长范围的光线。
荧光显微镜广泛应用在生命科学领域,可对组织和细胞的结构、形态、蛋白质表达、亚细胞结构等进行定位、定性观察及分析。
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