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ATCC细胞的培养与冻存及复苏技巧

ATCC提供了多种类型的培养基，包括DMEM、RPMI-1640、F-10等。消费者在选择培养基时，需要根据细胞株的特性进行选择。例如，很多肿瘤细胞株通常在DMEM培养基中生长良好，而**细胞则更适合在RPMI-1640中培养。此外，培养基中的高浓度糖类和氨基酸是维持细胞生命的关键。

ATCC细胞一般在37°C、5% CO2的环境下进行培养。确保培养箱的温度和CO2浓度稳定是至关重要的。过高或过低的温度均会影响细胞的生长速度和形态，甚至导致细胞的死亡。此外，细胞在培养过程中需要适当的湿度，以防止培养基的蒸发带来的浓度变化。

细胞冻存是细胞培养中的重要环节，通过低温保存可以延长细胞的使用时间，从而便于后续实验的开展。在细胞冻存和复苏的过程中，掌握一些技巧是确保细胞成功存活的关键。

冻存前的准备

在对细胞进行冻存前，需要对细胞进行适当的处理。通常情况下，选择对数生长期的细胞进行冻存效果*佳。此时，细胞增殖活跃，状态良好，能够提高冻存后的复苏率。此外，使用适当的冻存液（例如含有10% DMSO和90%培养基的溶液）可以保护细胞在冷冻过程中的损伤。DMSO能够有效降低细胞内的冰晶形成，减少细胞损伤。

冻存过程中的注意事项

在冻存过程中，温度的下降速率非常重要。细胞应当在-80°C下进行初步冷冻，通常在4小时内降到-80°C，随后转移至液氮中保存。需要强调的是，避免细胞在冷冻过程中遭受大于-130°C的冲击，以防止细胞过度**。

复苏后的处理

复苏细胞时，应从液氮中迅速取出细胞，立即置于37°C的水浴中解冻，时间控制在1-2分钟内，之后迅速转移至培养基中，以洗去冻存液。洗涤是为去除DMSO，以防止其对细胞活性的影响。复苏后的细胞应当置于适宜的培养环境中，并尽量减少光照，以促进细胞恢复。

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