细胞培养玄学-MRC-5细胞
MRC-5细胞，还有那些兄弟姐妹WI-38啥的，非常有用，广泛应用在病毒学实验上，但是超级难养，非常让人困扰。
zui近有人问起了MRC-5细胞，说实在这东西培养挺难的，而且充满玄学成分。夸张的说10个实验室有9个实验室养不好。隔壁土豪研究所每次要用就买一批，传代3次做完实验就扔了，因为越传越差没必要留，也留不住。我们实验室的方法是另一个实验室教的，他们毕业前来了新的研究生，天天跟着养细胞，养了2个月没养好，操作看起来啥都没问题，都快哭了。我跟着学了一次，很幸运学会了，回来传给手下，看起来也没问题。可是zui近连续复苏3次，都是传2代就不行了，半个月也长不满。我zui近亲自复苏了一批，还拍了照片，给大家看看吧。我们是1个T75冻存3支，所以复苏也是直接复苏在T75里的，复苏三天长满，1:3传代3天长满。其他人没传好的那些，复苏3天长满，传代后5天只能长到9成，不肯再长了，再传代现在10天过去了，勉强长到6成。
培养基其实没啥区别，DMEM、1640、MEM我都用过，都能养，我现在用DMEM养，上一代没看清楚用的1640，一样3天长满没任何问题。血清用国产的850块500mL一瓶的，也没问题，不过是别人筛过的批号，他们说这个批号好，我们跟风买了几十瓶。
关键在于胰酶，胰酶要很弱鸡的那种（自己用粉末配的都很弱鸡），不含EDTA，必须含葡萄糖。一个T75放8mL泡个3min就差不多了，吸掉6.5mL，用手拍一下T75两边，震一下就全掉下来了。至于养不养的好，剩下的就靠个人悟性了。
好的MRC-5，一定要长到这么满才传，这细胞有密度依赖性，太稀传代就嗝屁了。
传代后第贰天贴壁，长这样的，3天长满
如果传不好第贰天贴壁后就很瘦弱，长得很慢，像这样。长成这样后，无论你再怎么努力，换再好的培养基、血清也没救啦，也就勉强用用
沪公网安备 31011002002624号
