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上海酶研生物科技有限公司
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小鼠ELISA试剂盒的操作方法
1、首先将小鼠ELISA试剂盒恢复室温(大约30分),然后用纯水把清洗液配成工作浓度(一份浓缩清洗液加19份纯水)。
2、取出酶标板。每个标本需要6孔,阳性对照6孔。多余的用自封袋保存,记得放入干燥剂。
3、将细胞培养上清(或特异亲和纯化的抗体)50μl加入酶标微孔板,每个标本加6孔,阳性对照也是加6孔每孔50μl。然后每孔再加入50μl标本稀释液。贴上封板膜37℃温育30分钟。
4、弃去板内液体,洗板5遍后在不掉纤维的吸水材料上拍干或机洗5遍。再在每个标本的6孔中分别加入6种酶标二抗各100μl,通用阳性对照的6孔也一样。在加样图上或酶标板上做好标记。贴上封板膜37℃温育30分钟。
5、吸弃板内液体,洗板5遍后在不掉纤维的吸水材料上拍干或机洗5遍。每孔分别加入显色剂A和显色剂B各50μl,换一张新的封板膜贴板避光37℃显色20分钟。
6、本小鼠ELISA试剂盒特异性好一般肉眼即可观察出结果,看显色蓝的那个孔所对应的酶标二抗就知道此标本的Ig类或亚类。更可将反应终止液(每孔50μl)终止反应后用酶标仪450nm测定波长,630nm参考波长双波长测定结果,参看高值孔所对应的酶标二抗就知道此标本的Ig类或亚类。阳性对照0D小于0.5实验无效,需要重做。
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