RAW 264.7(小鼠单核巨噬细胞白血病细胞)
【细胞货号】 C5003
【细胞缩写】 RAW 264.7细胞
【细胞名称】 RAW 264.7(小鼠单核巨噬细胞白血病细胞)
【背景资料】 此细胞株源自Abelson鼠科白血病病毒诱导的肿瘤。 sIg-, Ia-抗原、Thy-1.2表面抗原阴性。此细胞株不分泌可检测到的病毒颗粒,XC斑点形成试验阴性。 可以胞饮中性红并吞噬乳胶颗粒与酵母聚糖。 可以抗体依赖性地分解绵羊红血球与肿瘤靶细胞。 LPS或PPD处理2天可诱导分解红血球但对肿瘤靶细胞无作用。
【细胞来源】 细胞主要来源ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN以及少数国内外大学建系
【代次】 P4
【规格】 复苏T25培养瓶(一瓶)或冻存1ml冻存管(两支)
【细胞数】 1*10(6)
【生物**级别】 1
【生物体】 小鼠
【组织来源】 Abelson鼠科白血病病毒诱导的肿瘤;单核细胞;巨噬细胞
【细胞形态】 不规则圆形
【细胞特性】 贴壁
【细胞活力】 95%(Viability by Trypan Blue Exclusion)
【细胞检测】 细胞不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、**、酵母和**
【培养条件】 详见细胞说明书
【传代方法】 建议1:2-1:3 两天换液一次
【冻存条件】 详见细胞说明书
【主要文献】 请具体查阅相关发表文章
2)边观察边消化,根据细胞的形态,终止消化时间,采取以半分钟间隔吹打细胞边缘,如可吹打下来,即终止消化。客户摸索比较好的消化时间。
3)随细胞有一份细胞操作说明书,请客户仔细查看。 4)记得加1%双抗,降低被污染的概率。另外尽早冻存留种,以备后用。
5)售后时间为一周,**于细胞本身的质量问题,而因乙方自己不当操作(不规范操作,消化过度,不加双抗导致的污染等)导致的细胞问题不在售后范畴。 6)收到细胞后,如细胞状态不佳,或培养中遇到问题,烦请当天尽快联系,以便处理。当天及时反馈细胞情况和细胞照片是售后跟踪处理重要的参考依据,请您务必重视。 7)刚收到细胞时,胎牛血清可以用15%培养两三天,利于细胞尽快恢复状态,细胞状态稳定后,再调回10%即可。 (其中1,2条针对于贴壁细胞,悬浮细胞详情请见细胞操作说明书) RAW 264.7(小鼠单核巨噬细胞白血病细胞)传代操作步骤: (一)贴壁细胞传代 1)提前将培养基、PBS放入37℃水浴锅内预热,用75%酒精擦拭后再放入超净台内。 2)吸除或倒掉细胞瓶内旧培养液,加少量PBS润洗细胞。 3)加入适量胰酶,使胰酶的量能盖住细胞,37℃孵育,每隔2~3min显微镜下观察,待贴壁细胞间间隙变大、细胞趋于圆形但还未漂起时弃去胰酶,加入新鲜培养基,晃动细胞瓶,终止胰酶作用。 4)用吸管小心吹打贴壁的细胞,制成细胞悬液。控制吹打的力度,避免产生大量的气泡。 5)将细胞悬液分别接种到另外的2~3个细胞瓶内,加入新鲜培养基,置37℃温箱培养,隔天观察贴壁生长情况。 (二)悬浮细胞传代 1)将细胞悬液转移到无菌离心管内,1000rpm离心5min。 2)弃去上清,加入新鲜的培养基,用吸管小心吹散沉淀,制成细胞悬液。 3)将细胞悬液分别接种到另外的2~3个细胞瓶内,加入新鲜培养基,置37℃温箱培养。
细胞常见问题及解决方案: 1)培养瓶有破裂,培养液有漏液:细胞极大可能会污染,所以我们会及时安排帮老师解决。 2)细胞漂浮:培养瓶不开封,瓶口酒精擦拭后平躺放置在培养箱。次日观察,如细胞大部分又贴回瓶底,表明细胞活力正常,剩余漂浮的细胞可以离心去掉,留10ml培养液培养观察,细胞生长至汇合度80%,进行消化传代;如细胞还是不贴壁,将细胞离心收集转到新培养瓶,原培养瓶加部分培养液继续培养,中间注意观察,我们的技术人员会一直跟踪指导,直到问题解决。3)对于生长缓慢的贴壁细胞:可采用适当的提高培养基中血清浓度,或隔日换液的方法来保证细胞的状态和生长速度。 4)对于生长不均的贴壁细胞:在培养过程中若出现细胞分布明显不均时(即某一区域细胞已重叠生长,而旁边则为一块空白),此时可将细胞进行消化,重新打散,贴壁,加入新培养基进行培养。 RAW 264.7(小鼠单核巨噬细胞白血病细胞)购买细胞注意事项: 1)收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好,培养液是否有漏液、浑浊等现象,若有上述现象发生请及时和我们联系。 2)仔细阅读细胞说明书,了解细胞相关信息,如细胞形态、所用培养基、血清比例、所需细胞因子等。 3)用75%酒精擦拭细胞瓶表面,显微镜下观察细胞状态。因运输问题贴壁细胞会有少量从瓶壁脱落,将细胞置于培养箱内静置培养过夜,隔天再取出观察。此时多数细胞均会贴壁,若细胞仍不能贴壁请用台盼蓝染色测定细胞活力,如果证实细胞活力正常,请将细胞离心后用新鲜培养基再次贴壁培养;如果染色结果显示细胞无活力,请拍下照片及时和我们联系,信息确认后我们为您再免费寄送一次。 4)建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片,记录细胞状态,便于和公司技术部沟通交流。
细胞接收后的操作流程与注意事项: 1)如果细胞为贴壁细胞,而收到时呈悬浮或者部分悬浮的状态,请将悬浮的细胞即时离心,加15%血清的完全培养基到新的培养皿/瓶继续培养3天;同时原培养瓶中剩下的贴壁细胞更换为15%血清的完全培养基培养3天。3天后若原瓶或者新瓶中的细胞都没有出现增值而是继续脱落死亡,请及时联系实验室技术人员会跟进解决 2)贴壁细胞生长缓慢;适当提高血清浓度(*高不能超过20%),或可根据该细胞生长密度,考虑胰酶消化后,转移到新的培养瓶继续培养 3)生长不均:贴壁细胞若出现分布不均,成岛状生长,可将细胞进行消化,重悬打散细胞,加入新鲜培养基进行培养 细胞常规培养传代流程(请严格遵照无菌操作) 1)吸出原培养瓶中的培养基,PBS缓冲液润洗细胞两次,加2-3ml 0.25%胰酶进行消化细胞(注意把握消化时间,通常控制在1-2min) 2)镜下观察消化情况,在细胞边缘缩小,贴壁松动时(不建议消化到细胞漂浮)去掉胰酶,加6-8ml完全培养基,轻轻吹打细胞层,尽量把细胞层吹落,吹散 3)取部分细胞悬液转移到新的培养皿/瓶中,添加适当的完全培养基,把细胞悬液打匀,于培养箱中培养 RAW 264.7(小鼠单核巨噬细胞白血病细胞)特别注意:(如使用公共实验室或者初次接触细胞培养,建议添加双抗培养) 1)收到细胞后请尽快更换为含15%血清的新鲜培养基,如因特殊情况需要继续使用原瓶,请在原瓶培养基中额外添加10%的血清,(原瓶培养基的继续使用时间*长不宜超过72小时) 2)贴壁细胞收到当天切忌立刻消化,请将细胞换液后放置培养箱孵育到**天再做消化传代,请优先选择直径6cm的培养皿进行传代培养 3)如签收时出现培养瓶壁破裂,漏液等情况请及时做好照片记录并联系实验室