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如何通过BLS电融合仪以及配件聚集创建胚胎
注射器内吸入培养基,在
35mm
组织培养板上微滴(大致直径
3mm
)点样成若干行(列)。向培养板内小心注入石蜡油使其覆盖整板,注意不要使石蜡油直接倾倒在微滴上。石蜡油很容易越过这些微滴。石蜡油的量要能完全覆盖这些微滴。
使用配件按照说明操作,制作
凹陷。
37
度, 5% CO2
条件下孵育培养板几个小时,目的是让培养基在液滴内达到平衡。这一步可以在形成凹陷的步骤之前进行。
实验前准备好待聚集的细胞、组织或胚胎,不要将它们长时间暴露在室温下或脱离*适培养条件时间过长。通过在组织培养板盖上加入几滴M2培养基和Tyrode’s 酸溶液来去除卵透明带。将组织培养板的培养区域表面如此处理后,胚胎将本能的黏附在表面——因此我们需要使用盖。确认所有培养基溶液和酸液都接近室温。将胚胎放置在一滴M2培养基上。取尽可能少的内含10-20个胚胎的培养基,并移到一滴酸液上。重复这个步骤并将胚胎移到新的一滴酸液上。让胚胎在吸头内保持上下移动,观察卵透明带是如何溶解的。迅速将胚胎移入M2培养基。用几滴培养基溶液洗涤并移入刚才制成的凹陷中。
胚胎培养条件是聚集产量的一个重要因素,因为胚胎要培养过夜,如果是四倍体胚胎在移入母体前需要培养
48
小时。在培养的每个细节都必须小心操作控制。这包括温度、大气、培养基、室温操作时间以及矿物油质量。
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