细胞培养的惨痛经验教训

细胞培养的惨痛经验教训

每天对待细胞比孝敬爹妈还用心，那真是捧在手里怕碎了，含在嘴里怕化了，看在眼里怕丢了 ，培养细胞时有哪些惨痛经验教训可以分享呢?

早走早脱身，从此专注黑生物

      1. 严格无菌操作，多喷喷酒精，要是对**的东西不放心，自己包自己送自己烘干。

2. 不要和别人共用试剂耗材，自己准备一套。

3. 有可能的话在拿到新细胞的时候做好支原体衣原体检测。

4. 水浴锅很脏，生化培养箱要是得手动加湿的话盘里的水也会很脏，勤换 (**水加进去)。

5. 晚上离开的时候*好给细胞房照紫外，超净台是用完就开。

6. *好的是同一时间就你一个人在用细胞房在养细胞。

非科班出身经验分享

1. 别怕浪费。枪头什么的只要有可能污染就换，如果用酒精灯就什么都稍微烤一下，别直接放到火上，离一段距离。

2. 动作要既轻柔又有力。动作太重会有一堆一堆的气泡，动作太轻就吹不下来... 刚开始的时候吹细胞太痛苦了，稍微一下就起泡。后来就是吹的时候枪里的培养基不要一次全都压出来，留一点，枪的*头部尽量深的在液面以下。

3. 离开过操作台的东西再进操作台之前一定要用酒精喷一遍，包括一切实验耗材、仪器、以及你带着手套的手。

4. 实验结束后对实验台的**。紫外什么的，用前用后都照个 30 分钟。

5. 身体的各个部分尽量的少接触不需要接触的地方的地方。比如实验台，又比如培养箱内部。

6. 细胞的密度根据细胞的性质、传代的时间以及自己的心情来定。培养基的话*多*多不要超过 2 天就要换一次。细胞可以不传代，但是培养基是一定要换的。

大概就是，不该碰的地方不碰，有影响的地方少碰; 该使劲的时候**不含糊，不该使劲的地方一定忍住。如果是比较简陋的操作台就一定要摆个酒精灯，所有操作紧密围绕在酒精灯周围进行。如果是**台子就多用酒精喷喷。感觉生物的实验，心疼钱就还是不要做了。

*后一点点**非科班的经验。癌细胞真是坚挺。有一次实在是不想传了，放了 5 天吧，感觉都长了几层出来，培养基都黄了。抱着试一试的心情传了一次，又坚强的活过来了。当然，状态肯定也差的很了。

换种心情，好好生活!

养了三年细胞，各种肿瘤细胞，说一点自己的看法：

1. 培养细胞前，可以看看细胞特点说明书，包括细胞正常生长的状态图、传代、培养基的类型等。

2. 不同细胞生长周期不同，有的生长很快，比如说 MDA-MB-231，传代的时候取离心悬液的十分之一就已经足够了，有的又是特别慢，等的人心焦，BT474 就是，传代是一分二，复苏起始的时候两周多才能长满，所以就要在培养细胞的过程中多多摸索了。

3. 对于娇弱的细胞，就得细心呵护了，胰酶消化不能过久，吹得时候要轻柔，离心时候也要注意转速和时间，每天都要去看一下细胞，肉眼观察培养基状况、显微镜下观察细胞生长状况。

4. 冻存细胞复苏后**天*好更换一次培养基。

5. 培养箱隔一段时间彻底用酒精棉擦洗一次。

6. 养细胞*大的教训：不能偷懒!

细胞虐我千百遍，我待细胞如初恋。

1. 不管买的细胞、惠赠的细胞，刚拿到手赶紧做两件事：检测是否有支原体污染; 迅速扩增冻存。

2. 发现有污染迅速处理掉，特别是当你养了很多种细胞时; **污染，**污染很容易发现，支原体污染的话，细胞会长的慢，买个支原体检测的 kit 定期检测一下。

3. 细胞房日常的值日清洁是必须的，此外还要定期熏蒸。

4. 细胞的传代一定要规律，保持相同的 confluency 和传代时间间隔，不要随心所欲或者拖延。

5. 注意个人卫生。

靠内心感动细胞

1. 自己的细胞自己养，血的教训。

2. 在生物**柜 (或者超净台)，枪头，血清管，血清，培养基，瓶子都足够好，并且细胞房有良好的卫生措施 (比如隔离服，手套，口罩，清洁，HEPA 等等) 且不违法操作原则的情况下，你其实很难污染。

3. 上述条件不完备的情况下，就要多注意无菌操作了：比如要用的东西提前拿到台子里照啊 (不过这个其实也不大好，因为会挡住紫外线)，使用前 SDS+酒精擦台子，进出超净台一定要酒精擦手。

4. 少对细胞说话，多靠内心来感动它们 (是的! 心不诚是不可以的!) 至少 1 天看 1 次。

养细胞很容易

养细胞真的不难，*关键几点：

1. 所有的东西使用*好的，如果你用的血清、培养皿、培养基、胰酶什么的都是进口的，真的很难相信你会把细胞养坏。

2. 动作要快，胰酶消化，换液什么，细胞暴露在空气中的时间越少越好。另外，要掌握好胰酶消化时间，所谓的细胞状态差，很多时候是传代的原因。

3. 有时间的话，需要细胞计数，传相应数目的细胞到培养皿中，可以大致清楚细胞的生长曲线，不会临时要处理，手足无措。

4. 要做什么心里要非常清楚，合理安排时间，细胞房的实验穿**行，可以节省很多时间，也不会耽误别人的实验。

5. 个人的实验器具自己收一套，不要和别人混用，*近换了什么新的东西稍微记一下，试剂一旦怀疑污染，马上丢。

6. 细胞房不能进去太多人，避免相互干扰。

细胞养不好，自挂东南枝

现在一大型药企养细胞做检测，工作量很大，很多地方都没办法非常仔细的做。但是两年下来只出现过一次污染，总结一下心得：

1. 好的洁净室，空调系统跟得上。

2. 好的生物**柜，硬件跟的上。

3. 瓶子移液器吸头大都是进口，耗材跟的上。除了这些就是自己的操作习惯了。

4. 任何东西不要从敞开的瓶口上面经过。

5. 虽然酒精灯会干扰**柜气流但是还是需要一盏用来勤烧瓶口。

6. 实验时所用材料的位置摆放要顺手，污染源和已**物品要分开放置。

养细胞就像打仗

细胞饲养涵盖的内容太广了，而且不同种类细胞的饲养难度以及技术要求不同，肿瘤细胞，成纤维细胞，上皮细胞... 甚至各类干细胞... 每一种都有自己的生长要求。如果只是单纯的一般性操作，大同小异，个人觉得练好技术的情况下注意几点就好:

1. 各种无菌，从培养基到操作过程再到培养箱，时刻注意无菌。本人曾经所在的实验室出现过大规模污染并*终导致所有细胞集体毁灭... 教训惨痛。

2. 培养基的配制一定要做好梯度摸索并详细记录，否则细胞死都不知道怎么死的。

3. 尽量提高操作熟练度，减少培养皿在培养箱外的滞留时间，细胞很脆弱，经不起折腾，不像人，热了有空调，冷了能烤火。

4. 把握好培养基更换的时间，不同细胞类型时间不同，早了浪费试剂，晚了可能全军覆没。

5. 经验很重要，养细胞的很多经验你是无法在公开的书籍和资料上找到的。多向实验室前辈学习，他们会让你少走很多弯路，真的。

养细胞就像打仗，知彼知己，百战不殆。只有了解你养的对象，才能把他养好。

细胞就是矫情

养细胞细胞这个东西呢有的时候真说不清。养过一段时间的巨噬细胞，一开始操作各种谨慎小心，随时默念各种无菌原则，培养基什么的都用的进口的，其实国产货真的不差，有钱就是任性! 但细胞还是萎靡不振，两个多星期过后实在懒得管，换液等操作也很随意的草草进行，酒精也懒得喷，结果这货却开始疯长，过了几天居然达到**要传一次代，而且数量甚至可以一传三， 所以说，有的细胞就是矫情。