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怎样选择适合你实验需要的抗体？
怎样选择适合你实验需要的抗体？
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第7年
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日期：2024-11-19 09:30
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摘要：
怎样选择适合你实验需要的抗体？
当我们要检测目的蛋白在组织中表达情况的时候，如何选择适合我们实验需要的抗体，并恰当保存使用，是每个科研人员需要细心考虑的。抗体种类繁多，品牌众多，技术参数不一，价格和质量更是相差甚大，如何购买到高质量价格合适的抗体，并准确地做出我们想要的结果，其中有很多细节需要注意。
一、怎样选择适合你实验需要的抗体？
1.一抗选择要点
（1）确定抗体的名字，注意中英文名字、它名、亚型等信息。
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当我们要检测目的蛋白在组织中表达情况的时候，如何选择适合我们实验需要的抗体，并恰当保存使用，是每个科研人员需要细心考虑的。抗体种类繁多，品牌众多，技术参数不一，价格和质量更是相差甚大，如何购买到高质量价格合适的抗体，并准确地做出我们想要的结果，其中有很多细节需要注意。
一、怎样选择适合你实验需要的抗体？
1.一抗选择要点
（1）确定抗体的名字，注意中英文名字、它名、亚型等信息。
（2）确定你的实验类型，Elisa，WB，IHC，ICC，还是FACS。一般抗体的说明书都会列出该抗体经验证过适用于何种实验的类型，如果抗体说明书没有提及的应用类型，并不意味着该抗体不适用于此种分析应用类型，而仅是说明尚未经过此种实验验证，请根据说明书列出的已验证的类型来选择适合你实验的抗体。
（3）确定实验样本的种属，Human，Mouse，还是Rat。一般抗体说明书都列出该抗体经试验验证过适用于何种物种实验，请根据说明书列出已验证的种属来选择适合你实验的抗体。
（4）样本蛋白的结构性质。了解样本蛋白的结构性质有助于选择*合适的抗体，待测样本蛋白的结构域和样本在提取和处理过程中是否会变性，蛋白空间构象的改变，会影响抗体的**亲和反应。
（5）单多克隆抗体的选择。市面上的抗体还是以多克隆抗体为主，一般单克隆抗体特异性强，但亲和力相对小，检测抗原灵敏度相对就低；而多克隆抗体特异性稍弱，但抗体的亲和力强，灵敏度高，但易出现非特异性染色（可以通过封闭等避免）。
2.二抗选择要点
（1）种属来源。主要根据一抗种属来源来决定购买二抗来源，如一抗是小鼠来源，那二抗就买抗小鼠的即可（羊、兔等均可）。
（2）标记物的选择。有HRP、Biotin、荧光素等标记物。一般SP三步法二抗选择Biotin标记的二抗，以与后面的SP结合反应，而**荧光染色就需要购买不同荧光素标记的二抗，如罗丹明、FITC、Cy3等常用荧光素。
二、抗体的稳定性
1.抗体的稳定性是自然界长期进化的结果。抗体是**系统中*重要的分子之一，其稳定性是自然进化筛选的结果。在众多物种中，抗体分子形成了保守而稳定的结构。
2.抗体分子的高Tm值。在室温下，甚至短时间温度达到50-60℃，抗体分子都能维持正确折叠，保持应有的活性。
3.抗体的纯度。采用先进的抗体纯化技术，确保抗体产品的高纯度，保障其抗体产品的稳定性。
4.抗体的浓度。高浓度的抗体产品可减少容器表面吸附造成的物质损失，高浓度的抗体稳定性更好，抗体产品中93%的浓度大于0.5mg/ml。
三、怎样保存已获得的抗体？
抗体无论是保存还是运输都应尽可能地避免反复冻融，收到抗体后请根据实验的需要，对抗体进行分装，避免同一管抗体反复冻融（反复冻融会导致抗体空间结构变性，导致多聚体形成，从而降低抗体的结合能力）。抗体保存得当与否，直接决定了抗体的活性和使用效果，如果抗体保存得当，抗体活性大部分都可以维持数年。请谨记，无论何时请按照说明书推荐的保存条件正确处理和保存抗体。
1.收到抗体后，请务必在4℃，12000rpm，离心3分钟，（无论是液体还是冻干粉状态），再打开管盖进行分装和保存（如果抗体体积小于50ul，请延长离心时间至5分钟，以保证全部抗体均离心下来）。抗体一般使用特制的储存管，只有在12000rpm离心3分钟，才能将附着在管壁或盖内的抗体全部离心下来（即使是在10000rpm离心也会离心不完全，导致出现抗体的量不足的现象）。
2.对于大部分抗体，比较合适的保存方式是，分装后保存在-20℃或者-80℃。
（1）对绝大多数抗体来说，保存在-20℃就完全足够了，没有任何证据显示保存在-80℃会更好。
（2）分装可以*大程度的降低反复冻融对抗体活性的损害，同时也降低了由于多次从同一管中吸取抗体造成的污染可能性。
（3）分装的量以一次实验用完为好，*少不能少于10ul每份。因为分装体积越小，抗体的浓度越可能会受到蒸发以及管壁吸附的影响。
（4）复融后的分装抗体如果一次用不完，将剩余母液保存在4℃，避免再冻起来。
（5）抗体工作液应该当天配制当天用完，4℃保存尽量不要超过1天。
（6）**避免将抗体保存在自动除霜冰箱中，将抗体保存在冰箱里层，避免温度变化造成反复冻融。
3.大部分抗体收到后4℃短暂保存1~2周对抗体活性没有影响。
4.大部分抗体的运输条件：一般的运输过程需要1~2周的时间，所以是在低温4℃的条件下来完成的。
