产品名称： Hieff™ PCR Master Mix (With Dye)

Hieff™ PCR Master Mix (With Dye)

产品描述

2×Hieff^TM PCR Master Mix是即用型的常规PCR预混合溶液，含有Taq DNA Polymerase，dNTP混合物，MgCl₂以及优化的缓冲体系，只需加入引物和模板即可进行扩增，大大简化实验的操作步骤，提高了高通量操作和实验结果的重现性。

Mix中加入电泳缓冲液和染料，使得PCR产物可以直接进行电泳，染料的存在不会干扰扩增效率。体系中含有的保护剂使得Master Mix 4ºC条件下长期放置，或经过反复冻融后仍可维持酶的活性以及产品的稳定性。PCR产物具有3’-dA突出端，可轻松克隆至T载体。

Hieff™ PCR Master Mix (With Dye) 运输与保存方法

 冰袋（wet ice）运输。收到产品后放到-20 ºC保存。

活性定义
用活性化的大马哈鱼精子作为模板/引物，在74ºC，30min内摄入10 nmol的全核苷酸为酸性不溶物的活性定义为1个活性单位（U）。
质量控制
核酸外切酶残留检测：20 μl本品和0.6 μg λ-Hind Ⅲ在74 ºC下孵育1小时，DNA的电泳谱带不发生变化。
核酸外内酶残留检测：20 μl本品和0.6 μg Supercoiled pBR322 DNA在74 ºC下孵育1小时, DNA的电泳谱带不发生变化。
大肠杆菌残留DNA检测: 50 μl体系中，以ddH2O为模板，扩增E.coil 16s rDNA基因。35个循环后扩增产物进行1% 琼脂糖凝胶电泳，EB染色，无扩增条带。
功能检测：50 μl体系中，以100 ng人基因组DNA为模板扩增α-1-antitrypsin基因。30个循环后取10% PCR产物进行1% 琼脂糖凝胶电泳，EB染色，观察到单一的360 bp条带。
Hieff™ PCR Master Mix (With Dye)稳定性检测：

图1. 2 ×Hieff^TM PCR Master Mix 分别在-20 ºC放置1年、4 ºC放置3个月、25 ºC放置1个月后，菌落PCR扩增1.2 kb片段。电泳结果显示2 × PCR Master Mix具有非常好的稳定性。
Hieff™ PCR Master Mix (With Dye)注意事项
1. 操作注意事项
由于Taq DNA Polymerase室温下也有一定的反应活性，PCR反应体系配制需在冰上进行。体系混匀后快速置于PCR仪进行反应。这样可以减少反应准备阶段的非特异扩增，有助于得到更好的PCR结果。
2. 引物设计注意事项
2.1 引物3’端*后一个碱基选择C或G；
2.2 引物3’端*后8个碱基应避免出现连续错配；
2.3 引物3’端尽量避免发卡结构的出现；
2.4 引物Tm值控制在55℃-65℃之间；
2.5 引物额外附加序列，即与模板非配对序列，不应参与引物Tm值计算；
2.6 引物GC含量控制在40%-60%之间；
2.7 正向引物和反向引物Tm值以及GC含量尽可能一致。

  Hieff™ PCR Master Mix (With Dye)应用实例
1. 反应体系配制（50μl）：

§ 针对不同模板的*佳反应浓度有所不同，下表为50μl反应体系推荐模板使用量，仅供参考。

2. PCR循环反应条件

* 退火温度需要根据引物的Tm值调整，一般设置成低于引物Tm值1-2℃即可。