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传染性对虾皮下和造血器官坏死病毒(IHHNV)核酸检测试剂盒(PCR-荧光探针法)实验的建立步骤
1、样品准备区 这个区域专门用作样品的准备,在制备和操作用于核酸提取的试剂时应该采取预防措施: 1)PCR产物和带有要扩增序列的DNA克隆不能在这个房间操作。 2)组织培养物、组织标本和血清样品都带进样品准备间处理,以根据应用的需要提取DNA或RNA。 3)用于样品处理的工具不能被用作普通分子克隆的工具,也不能用作操作靶序列。 4)DNA样品应该用有专门的防护或正压活塞式移液管操作,以防止在吸取样品时有气溶胶**。 5)大体积样品应该用单独包装的无菌一次性移液管吸取。 6)管子打开前都要简短离心以减少气溶胶的产生,而且管子不能用力崩开,这样会产生气溶胶。 7)任何时候都应该穿实验服和带手套,手套要经常更换,尤其在抽提过程中每一步之间都要更换。实验服要专门用于样品准备间,经常清洗。
2、传染性对虾皮下和造血器官坏死病毒(IHHNV)核酸检测试剂盒(PCR-荧光探针法)样品准备和RNA-PCR RNA-PCR的额外步骤需要额外的样品操作,这样增加了样品之间污染的机会。为了避免这一问题,反转录一步可以在样品准备区进行。在RNA-PCR中应用UNG以防止污染的方法也有报道。
3、前PCR区 必须有专门用于准备各种反应的区域,这个区域必须保持干净,而且没有来自克隆和样品准备的污染。前PCR区必须要有试剂和准备,特别是专门用于前PCR区的正压活塞式移液管。
4、传染性对虾皮下和造血器官坏死病毒(IHHNV)核酸检测试剂盒(PCR-荧光探针法)实验室试剂的操作 1)所用的所有溶液都应该没有核酸和(或)核酸酶(DNase和RNase)污染。 2)所有PCR试剂中使用的水都应该是高质量的-新鲜蒸馏的去离子水,用0.22μm过滤的,并且是高压**。 3)在20℃到25℃贮存的试剂建议加点像叠氮钠一类的抗微生物剂,在扩增试剂或样品制备试剂中加入0.025%的叠氮钠不抑制扩增反应。 4)所用试剂都应该以大体积配制,实验一下看试剂是否满意,然后分装成仅够一次使用的量进行贮存。 5)所有试剂和样品准备过程中都要使用一次性**的瓶子和管子。 6)新配制的试剂在用于准备新的标本之前应该加以检验。 7)样品准备和前PCR区所使用的移液管在不使用时都应该小心保存。
5、传染性对虾皮下和造血器官坏死病毒(IHHNV)核酸检测试剂盒(PCR-荧光探针法)在前PCR区建立PCR混合物 1)可以把即刻可用的“主混合物”溶液配好、分装并保存在-20℃或4℃,在实验室只涉及到扩增一种或少数几种特异序列时这样做很有用。 2)如果你的实验室使用多套引物,以致于配制包括所有试剂的单一反应混合物不够经济,可以考虑分装保存够**的PCR成分。 3)作为一个规则,应该保存一套阴性、弱阳性和强阳性对照样品来分析样品配制和PCR前过程的效率和洁净程度。而且,你也希望通过使用一个已知的弱阳性样品来验证你的样品缓冲液以证明里面不含扩增抑制物。 4)阴性样品要与每组样品同时做,以分析是否存在样品与样品之间的污染以及是否存在PCR产物的污染,阴性对照应该包括核酸以外的所有试剂。 5)当做阳性对照时,有两个理由决定了应该使用*少数量的核酸。 6)由于必须有对照反应,对照模板的特点应该予以考虑。
6、传染性对虾皮下和造血器官坏死病毒(IHHNV)核酸检测试剂盒(PCR-荧光探针法)后PCR区 PCR完成以后,需要分析样品并解释数据,应该留出一个专门用于反应后处理样品的地方。后PCR活动中使用的所用试剂、一次性耗材和仪器都必须是专门用于这一目的,决不能把实验室这一区域的试剂或仪器用于任何前PCR活动。7、控制污染的方法 已设计出很有力的酶学方法用来消除一种形式的污染—使用UNG,这一技术能有效地消除由PCR产物引起的污染。另一种控制污染的方法是使用紫外线,这种方法不能完全消除污染问题,但可以将污染降低几个数量级。100839-250 潮霉素B干粉 250mg 390
120692-2 硫酸庆大霉素溶液,15mg/mL 2ml 190
60208-10 硫酸卡那霉素溶液,50mg/mL 10ml 90
60302-1 硫酸卡那霉素干粉 1g 90
60203-1 硫酸新霉素干粉 1g 90
120695-5 新生霉素溶液,50mg/mL 5ml 690
120694-10 制霉菌素溶液,2mg/mL 10ml 490
120696-10 土霉素盐酸盐溶液,100mg/mL 10ml 190
120697-1mu 青霉素G钾盐溶液,200mg/mL 1mu 290
120698-5 青霉素G钠盐溶液 10ml 190
120699-25 多粘菌素 B 硫酸盐 5ml 990
100840-10 嘌呤霉素干粉 25mg 395
蛋白研究
80807A-50 动物细胞裂解液A(变性类,**沉淀用) 50 mL 190
80807B-50 动物细胞裂解液B(非变性类,**沉淀用) 50 mL 190
131006-100 RIPA裂解液(强) 100ml 190
131007-100 RIPA裂解液(中) 100ml 190
131008-100 RIPA裂解液(弱) 100ml 190
131009-100 NP-40裂解液 100ml 190
90707-50 动植物总蛋白微量提取试剂盒 50次 490
91204A-50 动植物膜蛋白微量制备试剂盒(附着型膜蛋白) 50次 490
90613-25/100 动物细胞核蛋白微量制备试剂盒 25次/100次 240/890
91203-30/100 一步式动物胞浆蛋白微量制备试剂盒 30次/100次 290/790
121208-50 液体样品蛋白纯化回收试剂盒 50次 490
130888-50 石蜡包埋组织蛋白提取试剂盒 50次 990
130889-50 昆虫细胞理解液 50ml 690
80808-1 蛋白酶抑制剂混合液 1 mL 120