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牛MGH基因核酸检测试剂盒(PCR法)实验的建立步骤
1、样品准备区 这个区域专门用作样品的准备,在制备和操作用于核酸提取的试剂时应该采取预防措施: 1)PCR产物和带有要扩增序列的DNA克隆不能在这个房间操作。 2)组织培养物、组织标本和血清样品都带进样品准备间处理,以根据应用的需要提取DNA或RNA。 3)用于样品处理的工具不能被用作普通分子克隆的工具,也不能用作操作靶序列。 4)DNA样品应该用有专门的防护或正压活塞式移液管操作,以防止在吸取样品时有气溶胶**。 5)大体积样品应该用单独包装的无菌一次性移液管吸取。 6)管子打开前都要简短离心以减少气溶胶的产生,而且管子不能用力崩开,这样会产生气溶胶。 7)任何时候都应该穿实验服和带手套,手套要经常更换,尤其在抽提过程中每一步之间都要更换。实验服要专门用于样品准备间,经常清洗。
2、牛MGH基因核酸检测试剂盒(PCR法)样品准备和RNA-PCR RNA-PCR的额外步骤需要额外的样品操作,这样增加了样品之间污染的机会。为了避免这一问题,反转录一步可以在样品准备区进行。在RNA-PCR中应用UNG以防止污染的方法也有报道。
3、前PCR区 必须有专门用于准备各种反应的区域,这个区域必须保持干净,而且没有来自克隆和样品准备的污染。前PCR区必须要有试剂和准备,特别是专门用于前PCR区的正压活塞式移液管。
4、牛MGH基因核酸检测试剂盒(PCR法)实验室试剂的操作 1)所用的所有溶液都应该没有核酸和(或)核酸酶(DNase和RNase)污染。 2)所有PCR试剂中使用的水都应该是高质量的-新鲜蒸馏的去离子水,用0.22μm过滤的,并且是高压**。 3)在20℃到25℃贮存的试剂建议加点像叠氮钠一类的抗微生物剂,在扩增试剂或样品制备试剂中加入0.025%的叠氮钠不抑制扩增反应。 4)所用试剂都应该以大体积配制,实验一下看试剂是否满意,然后分装成仅够一次使用的量进行贮存。 5)所有试剂和样品准备过程中都要使用一次性**的瓶子和管子。 6)新配制的试剂在用于准备新的标本之前应该加以检验。 7)样品准备和前PCR区所使用的移液管在不使用时都应该小心保存。
5、牛MGH基因核酸检测试剂盒(PCR法)在前PCR区建立PCR混合物 1)可以把即刻可用的“主混合物”溶液配好、分装并保存在-20℃或4℃,在实验室只涉及到扩增一种或少数几种特异序列时这样做很有用。 2)如果你的实验室使用多套引物,以致于配制包括所有试剂的单一反应混合物不够经济,可以考虑分装保存够**的PCR成分。 3)作为一个规则,应该保存一套阴性、弱阳性和强阳性对照样品来分析样品配制和PCR前过程的效率和洁净程度。而且,你也希望通过使用一个已知的弱阳性样品来验证你的样品缓冲液以证明里面不含扩增抑制物。 4)阴性样品要与每组样品同时做,以分析是否存在样品与样品之间的污染以及是否存在PCR产物的污染,阴性对照应该包括核酸以外的所有试剂。 5)当做阳性对照时,有两个理由决定了应该使用*少数量的核酸。 6)由于必须有对照反应,对照模板的特点应该予以考虑。
6、牛MGH基因核酸检测试剂盒(PCR法)后PCR区 PCR完成以后,需要分析样品并解释数据,应该留出一个专门用于反应后处理样品的地方。后PCR活动中使用的所用试剂、一次性耗材和仪器都必须是专门用于这一目的,决不能把实验室这一区域的试剂或仪器用于任何前PCR活动。7、控制污染的方法 已设计出很有力的酶学方法用来消除一种形式的污染—使用UNG,这一技术能有效地消除由PCR产物引起的污染。另一种控制污染的方法是使用紫外线,这种方法不能完全消除污染问题,但可以将污染降低几个数量级。YB3191 Tris饱和酚 100mL
YB100803 酸酚 100mL
YB100804 氯仿-异戊醇混合液 100mL
YB100805 酚-氯仿-异戊醇混合液 100mL
YB100935 超纯水 100mL
YB60604 DEPC水 100mL
YB80403 RNase-free水 10mL
YB71207 RNA洗脱液 50mL
蛋白质研究
XY80807动物细胞裂解液50mL(A)|50mL(B)XY131006RIPA裂解液(强)100mLXY131007RIPA裂解液(中)100mLXY131008RIPA裂解液(弱)100mLXY131009NP-40裂解液100mLXY90707动植物总蛋白微量提取试剂盒50次XY91204动植物膜蛋白微量制备试剂盒50次XY90613动物细胞核蛋白微量制备试剂盒25次|100次XY91203一步式胞浆蛋白微量制备试剂盒30次|100次XY121208液体样品蛋白纯化回收试剂盒50次XY81218植物总蛋白质微量提取试剂盒(SDS-PAGE)30次XY81219植物总蛋白质微量提取试剂(2DE)30次|100次XY81202**总蛋白质微量提取试剂盒50次XY90902**总蛋白质微量提取试剂盒30次XY100929**膜蛋白质微量提取试剂盒50次XY131064细胞表面蛋白分离试剂盒8次XY131066磷酸化蛋白富集试剂盒10次XY131067ConA 糖蛋白分离试剂盒10次XY131205WGA 糖蛋白分离试剂盒10次XY90508包涵体微量纯化试剂盒20次XY90509包涵体中量纯化试剂盒5次XY90510包涵体大量纯化试剂盒2次XY131121蛋白折叠试剂盒100次XY100302包涵体蛋白溶解及复性套装100次XY100102一站式His标记蛋白质微量纯化套装20次(A)|20次(B)XY100101镍柱介质2mL|10mLXY131057钴柱介质10mLXY120801镍柱原位再生试剂盒20次XY100202兔抗His标签多抗,HRP标记100μLXY111116一站式GST标记蛋白质微量纯化套装20次(A)|20次(B)XY120101谷胱甘肽琼脂糖2mLXY120705L-谷胱甘肽(还原型)5gXY120534兔抗GST标签多抗20μLXY120535HRP标记的兔抗GST标签多抗20μLXY130871一站式MBP标签蛋白纯化套装20次XY130573小鼠抗His标签单抗100μLXY130574小鼠抗Flag标签单抗100μLXY130575小鼠抗c-Myc标签单抗100μLXY130576小鼠抗HA标签单抗100μLXY130577小鼠抗GST标签单抗100μLXY130578小鼠抗V5标签单抗100μLXY130579小鼠抗MBP标签单抗100μLXY130580小鼠抗GFP标签单抗100μLXY130581小鼠抗mCherry标签单抗100μLXY130582小鼠RFP标签单抗100μLXY130583小鼠抗VSV-G标签单抗100μLXY130584小鼠抗T7标签单抗100μLXY130585小鼠抗CBP标签单抗100μLXY130586小鼠抗HSV标签单抗100μLXY130587小鼠抗E2标签单抗100μLXY130588小鼠抗S1标签单抗100μLXY130589小鼠抗Tag-100标签蛋白单抗100μLXY130590小鼠抗HPC4标签蛋白单抗100μLXY130591小鼠抗SUMO标签蛋白单抗100μLXY130592HRP标记内参抗体30μLXY131202即用型GFP标签蛋白裂解液100uLXY130413肝素琼脂糖5mL|50mLXY130417蓝胶琼脂糖5mL|50mLXY130421DEAE交换介质50mLXY130423Q交换介质50mLXY130422CM交换介质50mLXY130424SP交换介质50mLXY131020Sephacryl S-400基质10mLXY130425苯基介质50mLXY130426丁基介质50mLXY130427丁基硫介质50mLXY130418Protein A琼脂糖1mLXY130420Protein G琼脂糖1mLXY131201Protein A+G琼脂糖2mLXY100939福林酚试剂100mLXY90610卵白蛋白标准品1mLXY131070牛血清白蛋白标准品1mLXY131071牛血清γ 球蛋白标准品1mLXY131072预稀释BSA 蛋白标准品1mLXY131220预稀释BGG 蛋白标准品1mLXY131074SDS-PAGE 样品预处理试剂盒50次XY131122考马斯亮蓝R-25010gXY131123考马斯亮蓝G-25010gXY131078天然蛋白A1mgXY131079重组蛋白A1mgXY131080重组蛋白G1mgXY131081重组蛋白A/G1mgXY131082重组蛋白L1mgXY131075糖蛋白染色试剂盒10次XY131076磷酸蛋白染色试剂盒10次XY131077组氨酸标签蛋白染色试剂盒10次XY80814Bradford法蛋白定量试剂盒100mL|200mLXY80815BCA法蛋白定量试剂盒500次XY80816超敏型BCA法蛋白定量试剂盒500次XY131069还原剂兼容型BCA蛋白定量试剂盒250次XY101102改良Lowry法蛋白定量试剂盒1000次