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猫源性成分(Feline)核酸检测试剂盒(PCR法)实验的建立步骤
1、样品准备区 这个区域专门用作样品的准备,在制备和操作用于核酸提取的试剂时应该采取预防措施: 1)PCR产物和带有要扩增序列的DNA克隆不能在这个房间操作。 2)组织培养物、组织标本和血清样品都带进样品准备间处理,以根据应用的需要提取DNA或RNA。 3)用于样品处理的工具不能被用作普通分子克隆的工具,也不能用作操作靶序列。 4)DNA样品应该用有专门的防护或正压活塞式移液管操作,以防止在吸取样品时有气溶胶**。 5)大体积样品应该用单独包装的无菌一次性移液管吸取。 6)管子打开前都要简短离心以减少气溶胶的产生,而且管子不能用力崩开,这样会产生气溶胶。 7)任何时候都应该穿实验服和带手套,手套要经常更换,尤其在抽提过程中每一步之间都要更换。实验服要专门用于样品准备间,经常清洗。
2、猫源性成分(Feline)核酸检测试剂盒(PCR法)样品准备和RNA-PCR RNA-PCR的额外步骤需要额外的样品操作,这样增加了样品之间污染的机会。为了避免这一问题,反转录一步可以在样品准备区进行。在RNA-PCR中应用UNG以防止污染的方法也有报道。
3、前PCR区 必须有专门用于准备各种反应的区域,这个区域必须保持干净,而且没有来自克隆和样品准备的污染。前PCR区必须要有试剂和准备,特别是专门用于前PCR区的正压活塞式移液管。
4、猫源性成分(Feline)核酸检测试剂盒(PCR法)实验室试剂的操作 1)所用的所有溶液都应该没有核酸和(或)核酸酶(DNase和RNase)污染。 2)所有PCR试剂中使用的水都应该是高质量的-新鲜蒸馏的去离子水,用0.22μm过滤的,并且是高压**。 3)在20℃到25℃贮存的试剂建议加点像叠氮钠一类的抗微生物剂,在扩增试剂或样品制备试剂中加入0.025%的叠氮钠不抑制扩增反应。 4)所用试剂都应该以大体积配制,实验一下看试剂是否满意,然后分装成仅够一次使用的量进行贮存。 5)所有试剂和样品准备过程中都要使用一次性**的瓶子和管子。 6)新配制的试剂在用于准备新的标本之前应该加以检验。 7)样品准备和前PCR区所使用的移液管在不使用时都应该小心保存。
5、猫源性成分(Feline)核酸检测试剂盒(PCR法)在前PCR区建立PCR混合物 1)可以把即刻可用的“主混合物”溶液配好、分装并保存在-20℃或4℃,在实验室只涉及到扩增一种或少数几种特异序列时这样做很有用。 2)如果你的实验室使用多套引物,以致于配制包括所有试剂的单一反应混合物不够经济,可以考虑分装保存够**的PCR成分。 3)作为一个规则,应该保存一套阴性、弱阳性和强阳性对照样品来分析样品配制和PCR前过程的效率和洁净程度。而且,你也希望通过使用一个已知的弱阳性样品来验证你的样品缓冲液以证明里面不含扩增抑制物。 4)阴性样品要与每组样品同时做,以分析是否存在样品与样品之间的污染以及是否存在PCR产物的污染,阴性对照应该包括核酸以外的所有试剂。 5)当做阳性对照时,有两个理由决定了应该使用*少数量的核酸。 6)由于必须有对照反应,对照模板的特点应该予以考虑。
6、猫源性成分(Feline)核酸检测试剂盒(PCR法)后PCR区 PCR完成以后,需要分析样品并解释数据,应该留出一个专门用于反应后处理样品的地方。后PCR活动中使用的所用试剂、一次性耗材和仪器都必须是专门用于这一目的,决不能把实验室这一区域的试剂或仪器用于任何前PCR活动。7、控制污染的方法 已设计出很有力的酶学方法用来消除一种形式的污染—使用UNG,这一技术能有效地消除由PCR产物引起的污染。另一种控制污染的方法是使用紫外线,这种方法不能完全消除污染问题,但可以将污染降低几个数量级。YB100922 亚硫酸氢盐DNA修饰试剂盒 50次
YB130301 DNA甲基化修饰试剂盒 150次
YB130428 甲基化PCR 2.0试剂盒 150次
YB100923 甲基化专一性PCR试剂盒 50次
YB100936 人甲基化/非甲基化DNA标准品 100次
YB111009 端粒酶重复片段扩增试剂盒 50次
YB100204 一站式PCR-SSCP套装 1套
YB101003 RAPD PCR试剂盒(含银染) 100次
YB111109 DOP-PCR试剂盒 50次
YB130408 eTS抑制性差减杂交PCR试剂盒 10次
克隆及表达
XY60105加A试剂盒50次XY60106加T试剂盒50次XY60107DNA粘转平试剂盒20次XY130813DNA磷酸化试剂盒20次XY130828DNA去磷酸化试剂盒20次XY4610G载体2μgXY51104B载体2μgXY60603即用型蓝白T载体A型(T7-SP6,有MCS)20次XY120512即用型蓝白T载体B型(T7-T3,有MCS)20次XY120513即用型蓝白T载体C型(T7-T3,无MCS)20次XY120514即用型蓝白T载体D型(无启动子,有MCS)20次XY120515即用型蓝白T载体E型(无启动子,无MCS)20次XY60803可保种型蓝白T载体50ngXY131233零背景T载体20次XY60908质粒(载体)系列产品2μgXY120402PCR专用LIC克隆套装1ugXY130859M13mp18 DNA10μg(A)|10μg(B)XY90407Lambda DNA5μg(A)|250μg(B)|250μg(C)XY130860φX174 RFⅠDNA30μgXY130861φX174RF Ⅱ DNA30μgXY130987接头DNA5nmol(A)|5nmol(B)|5nmol(C)|5nmol(D)|5nmol(E)XY130988EcoR I-Not I-BamH I接头1nmolXY130204Oligo快速复性液,10×1mLXY100103裂殖酵母化学感受态细胞制备试剂盒20次(A)|20次(B)XY81109酵母化学感受态细胞制备试剂盒20次(A)|20次(B)XY81201酵母电转感受态细胞制备试剂盒20次XY100502高效E.coli感受态细胞制备试剂盒20次XY81024DH5α感受态细胞0.1mL×10XY81221HB101感受态细胞0.1mL×10XY90207JM109感受态细胞0.1mL×10XY90208SURE感受态细胞0.1mL×10XY80701TG1感受态细胞0.1mL×10XY80806Top10感受态细胞0.1mL×10XY90504XL1-Blue感受态细胞0.1mL×10XY100818MDS 42rec A trf A菌种1mLXY100819MDS 42T7lac 菌种1mLXY70602DNA快速连接试剂盒30次|100次XY90801一站式TA克隆试剂盒20次(A)|20次(B)XY131126一站式平末端克隆试剂盒20次XY130827小RNA克隆试剂盒10次XY130681通用 miRNA 克隆接头0.83nmolXY51101常态转化液20次XY50901菌落PCR试剂盒2.050次XY100884IPTG干粉2.5gXY80909IPTG溶液1.5mLXY100885X-Gal干粉0.5gXY80910X-Gal溶液10mLXY70803免质粒提取筛选试剂盒1000次XY60404超级培养基100mLXY100602干粉型LB培养基250gXY100820干粉型LB-Lennox培养基250gXY100821干粉型2×YT培养基250gXY100822干粉型SB培养基250gXY100813干粉型SOB培养基250gXY100823干粉型SOC培养基250gXY100825自诱导培养基(lac启动子)200mLXY100824干粉型TB培养基250gXY100826穿刺培养基10管XY100827菌种保存液10管(A)|10管(B)XY130895YPD液体培养基100mLXY130896YPG液体培养基100mLXY130897YPDG液体培养基100mLXY130898MAL指示剂培养基100mLXY130899GAL指示剂培养基100mLXY130901酵母生产及产孢培养基100mLXY130902酵母产孢培养基100mLXY120517零诱导培养基100mLXY120688放线菌酮溶液1mLXY120680放线菌素D溶液1mLXY120681可溶性两性霉素B溶液1mLXY60206氨苄青霉素溶液10mLXY60101氨苄青霉素干粉1gXY120682杆菌肽溶液1mLXY120704博莱霉素溶液1mLXY120683羧苄青霉素钠溶液1mLXY120684噻孢霉素溶液1mLXY120685先锋霉素溶液1mLXY60102氯霉素干粉1gXY60207氯霉素溶液10mLXY120687环孢霉素A溶液1mLXY120686细胞松弛素B溶液0.1mLXY131234地塞米松溶液1mLXY120690红霉素溶液10mLXY100838遗传霉素(G418)干粉100mgXY100839潮霉素B干粉250mgXY120692硫酸庆大霉素溶液2mLXY60208硫酸卡那霉素溶液10mLXY60302硫酸卡那霉素干粉1gXY120693丝裂霉素C溶液1mLXY60203硫酸新霉素干粉1gXY120695新生霉素溶液5mLXY120694制霉菌素溶液10mLXY120696土霉素盐酸盐溶液10mLXY120697青霉素G钾盐溶液1MuXY120698青霉素G钠盐溶10mLXY120699多粘菌素 B 硫酸盐5mLXY100840嘌呤霉素干粉25mgXY120700利福平溶液10mLXY131232壮观霉素溶液10mLXY120701链脲佐菌素溶液10mLXY60210硫酸链霉素溶液10mLXY60209盐酸四环素溶液10mLXY120702衣霉素溶液1mLXY60301盐酸四环素干粉1gXY120703盐酸万古霉素溶液10mL
探针标记及检测