产品名称：人乳腺癌紫杉醇耐药性细胞

一、       基本特性

细胞名称：MCF-7-Taxol

描述：采用紫杉醇逐渐增加剂量和间歇大剂量冲击相结合的方法诱导MCF-7细胞对紫杉醇的耐药性，细胞对紫杉醇的*大耐受性达5 μg/mL。

细胞形态：上皮样

组织来源：女性的腺癌，乳腺，胸水

细胞活力：95％（Viability by Trypan Blue Exclusion）

细胞检测：细胞不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、**、酵母和**

培养条件：RPMI-1640(Gibco,31800-022)，90%；上等胎牛血清，10%。 气相：空气，95%；二氧化碳，5%； 温度：37℃。

二、       使用方法

客户收到细胞后，请按照以下方法进行操作。

1.    收到细胞，请查看瓶子是否有破裂，培养基是否漏出，是否浑浊，如有请尽快和我们联系。

2.    如包装完好，取出25cm2培养瓶，75%酒精**,拆下封口膜,在显微镜下观察细胞形态是否正常，细胞的贴壁情况以及细胞密度,然后放入37℃，5%CO2细胞培养箱中静置6-8小时或者过夜，以稳定细胞状态。

3.    细胞状态稳定后，弃除培养瓶中大部分液体，只剩5-10ml左右培养液继续培养就可以了，超过80%汇合度时，请按细胞培养条件传代培养。

如为悬浮细胞，吸出培养液，1000转/分钟离心3-5min,吸出上清，管底细胞用新鲜培养基悬浮细胞后移回培养瓶。

4.    细胞传代

1)    吸出25cm2培养瓶中的培养基,用PBS 2-3ml清洗细胞一次；

2)    添加0.25%胰蛋白酶消化液约1.5ml至培养瓶中，37℃温浴1-2min左右；倒置显微镜下观察，待细胞回缩变圆后吸弃消化液，再加入完全培养液终止消化；

3)    用吸管轻轻吹打混匀，按1:2或1:3等适当的比例进行接种传代，然后补充新鲜的完全培养基至5ml，放入37℃，5%CO2细胞培养箱中培养；

4)    待细胞完全贴壁后，培养观察。之后每隔2-3天更换新鲜的完全培养基。

三、       注意事项

1.    在细胞培养过程中，请注意保持无菌操作；

2.    传代培养过程中，胰酶消化时间不宜过长，否则会影响细胞贴壁及其生长状态；

3.    该细胞只可用于科研

细胞基本技术

冻存细胞的复苏
人乳腺癌紫杉醇耐药性细胞应遵守慢冻快融的原则。先将水浴锅调至37-37.5度，取出冻存的细胞迅速放入后将细胞面浸至水面以下不断摇动至融化。
在无菌台内将完全培养基加入50ml的小培养瓶内，约5ml左右，然后用无菌吸管从冻存管内取出细胞，置培养并内轻轻摇晃，使细胞均匀后置培养箱内培养。
传代:
贴壁细胞:
对于贴壁细胞应先吸(倒)尽培养基，吸的越干净越好，以免中和后加入的消化液，使强度减弱（或PBS洗1－3次）。50ml培养瓶加入消化液约1-3ml，按此比例进行消化，(根据经验)，晃动使消化液铺均匀置37度培养箱约2-5分钟，镜下见细胞收缩变圆或少数脱落后，轻轻振动瓶底使细胞全部脱落，加入2-3ml完全培养基后，轻轻吹打，使细胞基本成单个悬浮，然后分置其它无菌培养瓶内，加入完全培养基后继续培养或实验。
悬浮细胞:
一般传代可直接将细胞原液分置其它培养瓶内，加入完全培养基继续培养，如要高浓度可先离心1000rpm，5min后加入完全培养基，轻轻吹匀后，分置其它培养瓶内加入完全培养基继续培养。
冻存 
 将贴壁细胞消化后离心收集，悬浮细胞直接离心收集，以完全培养基或胎牛血清重悬细胞至终浓度约106/ml。加入10%的DMSO。以每管1～2ml分装至冻存管中。用绝热材料包裹置-70摄氏度冰箱冷冻过夜。次日保存到液氮中。 
人乳腺癌紫杉醇耐药性细胞
支原体污染及检测：
  （1）.支原体污染在细胞培养中*常见、不易被查觉，但支原体污染可显著影响细胞功能干扰实验结果。支原体是介于**和病毒之间的目前所知能独立生活的*小微生物，它无细胞壁，形态呈高度多形性，*小直径0.2um，可通过滤器。
 人乳腺癌紫杉醇耐药性细胞
 支原体在污染细胞后，它通过影响细胞的DNA、RNA 的合成及急速消耗培养基中的氨基酸来抑制细胞的生长，并能降低细胞的融合率。因此，在运用各种细胞系进行实验研究时，首先要证明所用细胞有无支原体的污染。
 经过严格质控，不含有**、**、病毒（HIV、HBV、HCV）、支原体。
 （2）.支原体污染后，培养基可不发生浑浊，细胞病变轻微或不明显，因此难以发现。目前，支原体检测的方法有以下几种。
（a）.相差显微镜观察；
（b）.低张处理地衣红染色法；
（c）.荧光染色法；
（d）.酶标法；
（e）.PCR法：基础医学细胞中心使用该方法进行检测。
               优点：灵敏度高，检测耗时短，样品量小
              （只需50ul细胞培养用液上清）。
            缺点：引物及制剂费用较高。
               
                ★★★★★希望这些基本技术及资料可以帮到您★★★★★
人乳腺癌紫杉醇耐药性细胞
特点：
1.传代情况：P2 
2.活性好、稳定性高、适应性强，易培养
3.传代快、多：2-3天传一代，普通可传10代以上 肿瘤细胞无限制
4.纯度高达95% 无污染和其他杂细胞
5.有技术疑问可以提供一对一的解答：专业，及时，耐心
6.货期短，一般冻存管5-7个工作日，复苏7-15个工作日。

 ★我库细胞近3000种，来源于美国ATCC.
      种属来源：小鼠、大鼠、人、猴、牛
      组织来源: 各组织癌细胞、表皮细胞、上皮细胞、等等....
      细胞都是经过严格质量控制。

EBTr 牛胚气管 品牌ATCC 规格25毫升/株. 货期1-2周
VERO 非洲绿猴肾 品牌ATCC 规格25毫升/株. 货期1-2周
MDBK 牛肾细胞 品牌ATCC 规格25毫升/株. 货期1-2周
HepII 猴肾 品牌ATCC 规格25毫升/株. 货期1-2周
COS-1 SV40转化的非洲绿猴肾 品牌ATCC 规格25毫升/株. 货期1-2周
COS-7 SV40转化的非洲绿猴肾 品牌ATCC 规格25毫升/株. 货期1-2周
LLC-MK2 恒河猴肾 品牌ATCC 规格25毫升/株. 货期1-2周
MLA-144 长臂猿**瘤 品牌ATCC 规格25毫升/株. 货期1-2周
B95-8 EBV转化的绒猴白细胞 品牌ATCC 规格25毫升/株. 货期1-2周
NISE-Sacy-12 蓖麻蚕卵细胞 品牌ATCC 规格25毫升/株. 货期1-2周
ZC-7901 草鱼吻端细胞 品牌ATCC 规格25毫升/株. 货期1-2周
RF/6A 猴脉络膜-视网膜细胞(内皮) 品牌ATCC 规格25毫升/株. 货期1-2周
Mv1Lu 貂肺上皮细胞 品牌ATCC 规格25毫升/株. 货期1-2周
Pcc4 胚癌细胞 品牌ATCC 规格25毫升/株. 货期1-2周
EL4 **瘤 品牌ATCC 规格25毫升/株. 货期1-2周
EL4IL-2 **瘤 品牌ATCC 规格25毫升/株. 货期1-2周
P815 肥大细胞瘤 品牌ATCC 规格25毫升/株. 货期1-2周
YAC-1 **瘤 品牌ATCC 规格25毫升/株. 货期1-2周
MFC 前胃癌 品牌ATCC 规格25毫升/株. 货期1-2周
L1210 **白血病 品牌ATCC 规格25毫升/株. 货期1-2周
AtT20 垂体瘤 品牌ATCC 规格25毫升/株. 货期1-2周
P388D1 **样瘤 品牌ATCC 规格25毫升/株. 货期1-2周
NS-1 骨髓瘤 品牌ATCC 规格25毫升/株. 货期1-2周
SP2/0 骨髓瘤 品牌ATCC 规格25毫升/株. 货期1-2周
SRS-82 腹水瘤 品牌ATCC 规格25毫升/株. 货期1-2周