产品名称： Hieff™ Hot Start DNA Polymerase热启动DNA聚合酶

Hieff™ Hot Start DNA Polymerase热启动DNA聚合酶

产品描述

    Hieff^TM Hot Start DNA Polymerase(HS DNA Polymerase)是经过化学修饰的热稳定重组型Taq DNA Polymerase，在室温下活性被完全封闭，只有经过95℃加热后活性才被释放，可防止在样品准备及反应升温阶段产生非特异扩增和引物二聚体。与基于抗体的热启动Taq酶相比，化学修饰的HieffTM Hot Start DNA Polymerase活性封闭更彻底，严谨性更高；与现有化学修饰的热启动Taq酶相比，HieffTM Hot Start DNA Polymerase的激活时间只需要5分钟，兼容现有的PCR程序。
  Hieff^TM Hot Start DNA Polymerase的反应缓冲液中的组分、浓度都经过优化，使得引物与模板结合的严谨性提高，从而*大程度的减少非特异扩增和引物二聚体，非常适合于从复杂模板(基因组，cDNA)中扩增低拷贝基因。PCR产物3’端带A，可克隆至T载体。另外，产品中提供的PCR Enhancer可有助于高GC含量片段的扩增。
产品组分

Hieff™ Hot Start DNA Polymerase热启动DNA聚合酶活性定义
用活性化的大马哈鱼精子DNA作为模板/引物，74℃ 30分钟内，摄入10 nmol的全核苷酸为酸性不溶物的活性定义为1个活性单位（U）。
运输与保存方法
冰袋（wet ice）运输。收到产品后放到-20 ºC保存。
质量控制
核酸外切酶残留检测：10 U本品和0.6 μg λ-Hind Ⅲ在74 ºC下孵育1小时，DNA的电泳谱带不发生变化。
核酸内切酶残留检测：10 U本品和0.6 μg Supercoiled pBR322 DNA在74 ºC下孵育1小时，DNA的电泳谱带不发生变化。
大肠杆菌残留DNA检测: 50 μl体系中，加入2U本品，以ddH2O为模板，扩增E.coil 16s rDNA基因。35个循环后扩增产物进行1% 琼脂糖凝胶电泳，EB染色，无扩增条带。
Hieff™ Hot Start DNA Polymerase热启动DNA聚合酶功能检测：PCR体系中加入1.25U本品，以100 ng人基因组DNA为模板扩增α-1-antitrypsin基因。35个循环后取10% PCR产物进行1% 琼脂糖凝胶电泳，EB染色，观察到单一的360 bp条带。

引物设计注意事项
1）引物3’端*后一个碱基*好为G或者C；
2）引物3’端*后8个碱基应避免出现连续错配；
3）引物3’端尽量避免发夹结构出现；
4）引物的Tm值调整至55℃-65℃之间。
5）引物额外附加序列，即与模板非配对序列，不应参与引物Tm值计算；
6）引物的GC含量控制在40%-60%之间；
7）正向引物和反向引物Tm值以及GC含量尽可能一致。

Hieff™ Hot Start DNA Polymerase热启动DNA聚合酶1. 反应体系配制

Hieff™ Hot Start DNA Polymerase热启动DNA聚合酶注：a, 对于大多数PCR反应，Mg²⁺*佳浓度为1.5-2 mM。体系中已含有终浓度为2.0 mM的Mg2+，如有需要，可用25 mMMgCl₂，以0.2-0.5 mM为间隔向上摸索Mg²⁺浓度梯度。

b, 推荐仅当模板GC含量＞60%且优化条件也无法正常扩增时使用，可能会降低保真度。

c, 不同模板*佳反应浓度有所不同，下表为50 μl反应体系推荐模板使用量：

1.        PCR反应条件设置：

Hieff™ Hot Start DNA Polymerase热启动DNA聚合酶注：a. 如扩增不理想，可适当延长95℃预变性时间，*长可至10 min。

b. 退火温度需要根据引物退火温度调整，一般设置成低于引物退火温度1-2℃即可。