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Hieff™ First Strand cDNA Synthesis Super Mix for RT-qPCR
产品描述
HieffTM First Strand cDNA Synthesis Super Mix for RT-qPCR基于HieffTM Reverse Transcriptase（Cat No. 11101ES84），该酶是在M-MLV (RNase H-) Reverse Transcriptase基础上经过多点突变得到的全新逆转录酶，热稳定性提高，在
5 ×Super Mix中含有逆转录反应所需的所有组分 (Buffer、dNTP、HieffTM Reverse Transcriptase、RNase inhibitor、Random primers/Oligo dT primer mix) ，加入模板RNA和水即可迅速进行反应。RNA模板的体积*多可加到总体积的80%，非常适合于低浓度RNA模板的逆转录反应。5 ×Super Mix在-20℃不会冻结，使用方便。
该产品适用于两步法RT-qPCR检测，针对qPCR进行特别优化，比例优化的Random primers/Oligo dT primer mix，使cDNA合成可从RNA转录本的各个区域起始，*大程度保证了qPCR结果的可重复性。逆转录产物兼容SYBR®Green和探针法qPCR，可以根据实验目的，选择HieffTM qPCR SYBR® Green Master Mix (Cat No. 11201ES03/11202ES03/11203ES03)或HieffTM qPCR TaqMan Probe Master Mix (Cat No. 11204ES03)等试剂配合使用，进行高性能的基因表达分析。
a 包含Buffer、dNTP、HieffTM Reverse Transcriptase、RNase inhibitor、Random primers/Oligo dT primer mix。
b 除不含HieffTM Reverse Transcriptase外，其余成分与5 ×Super Mix相同，用于配制对照反应。
Hieff™ First Strand cDNA Synthesis Super Mix for RT-qPCR运输与保存方法
冰袋（wet ice）运输。产品在-20 ºC保存，有效期2年。
质量控制
所有组分经检测均无核酸外切酶，核酸内切酶，RNase残留。
功能检测：以1 pg-1 μg HeLa cell total RNA为模板，测试qRT-PCR性能。以6个数量级的模板量的对数值对Ct值做标准曲线，R2>0.990，斜率在-3.20到-3.60之间。
Hieff™ First Strand cDNA Synthesis Super Mix for RT-qPCR客户需要准备的材料
RNase free的1.5 ml微量离心管或0.2ml PCR管
水浴锅或PCR仪
冰
RNA（高质量的完整的RNA对于获得高质量的cDNA是至关重要的）
Hieff™ First Strand cDNA Synthesis Super Mix for RT-qPCR应用实例
1. 在RNase free离心管中配制如下混合液，用移液器轻轻吹打混匀。
2. 对照反应（可选）
对照反应是指不加逆转录酶的逆转录阴性对照反应，用于检验RNA模板中是否有基因组DNA残留。在RNase free离心管中配制如下混合液，用移液器轻轻吹打混匀。
3. 按下列条件进行**链合成反应：
标准程序（可获得高质量的cDNA）
或快速程序（适用于大多数RT-qPCR实验，效果与标准程序相当）
4. cDNA产物可在
**链cDNA产物可直接用作qPCR反应的模板。建议作为模板的cDNA产物的体积不超过qPCR反应体积的1/10。
可选择选择HieffTM qPCR SYBR® Green Master Mix (Cat No. 11201ES03/ 11202ES03/ 11203ES03) 或HieffTM qPCR TaqMan Probe Master Mix (Cat No. 11204ES03)作为qPCR试剂。
Hieff™ First Strand cDNA Synthesis Super Mix for RT-qPCR注意事项
1）5 ×Super Mix及5 × Control Mix含有高浓度的甘油，在使用前请短暂离心收集到反应管底部，并用移液枪轻轻吸打充分混匀后，准确吸取。
2）10 μl逆转录反应体系建议加入不超过500 ng的Total RNA。如果目的基因表达量非常低，*多加入1 μg Total RNA，否则加入RNA量过高，可能会超出后续定量PCR的线性范围。反应体积可根据需要等比例放大。
3）如果加入RNA模板体积较大 (如超过2 μl)，请确保RNA是溶于水中而不是TE中，因为TE中的EDTA会对gDNA去除以及逆转录反应产生抑制。
4） 如果在qPCR实验中发现对照反应的Ct值与实验组相差<5，则说明RNA模板有可能污染基因组DNA。此时可选择HieffTMFirst Strand cDNA Synthesis Super Mix for RT-qPCR(+gDNA wiper) (Cat No. 11104ES70)，以彻底消除基因组DNA背景。
5）逆转录反应的快速程序适合于大多数RT-qPCR实验。一般情况下，结果与标准程序没有显著可见的差异。如果使用快速程序，发现目的基因的扩增效率较差，或者Ct值过大，则改用标准程序，以提高cDNA的产量。
