PCR产物电泳结果分析 1、非特异性条带: 1) 可能原因包括引物设计不佳、退火温度不合适、模板量过高或Mg2+浓度过高。 2) 解决方法包括优化引物设计、调整退火温度、减少模板量或调整Mg2+浓度。 2、产物序列错误: 1) 低保真度的DNA聚合酶、Mg2+浓度过高、非合适模板量、紫外线暴露、错误的引物设计。 2) 解决方法包括使用高保真度的DNA聚合酶、调整Mg2+浓度、优化模板量、避免紫外线直接照射、正确设计引物。 3、阴性对照中有产物: 1) 可能因RNA提取污染或错误的引物设计。 2) 解决方法包括在反转录前用DNAase I消化DNA、优化引物设计。
PCR产物电泳结果分析
1、非特异性条带:
1) 可能原因包括引物设计不佳、退火温度不合适、模板量过高或Mg2+浓度过高。
2) 解决方法包括优化引物设计、调整退火温度、减少模板量或调整Mg2+浓度。
2、产物序列错误:
1) 低保真度的DNA聚合酶、Mg2+浓度过高、非合适模板量、紫外线暴露、错误的引物设计。
2) 解决方法包括使用高保真度的DNA聚合酶、调整Mg2+浓度、优化模板量、避免紫外线直接照射、正确设计引物。
3、阴性对照中有产物:
1) 可能因RNA提取污染或错误的引物设计。
2) 解决方法包括在反转录前用DNAase I消化DNA、优化引物设计。