RNAi质粒载体构建服务|实验技术服务

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RNAi质粒载体构建服务|实验技术服务——pCzn1质粒+Arctic Express宿主菌低温表达体系。
我们具备丰富的蛋白表达设计经验及实验操作技巧，承诺客户不成功不收费。在获得重组蛋白产品的同时，我们也会提供相应的原始数据和原始图片,不需要再额外花费精力重复实验。另一方面，我们所有的实验数据真实可信，我们提供原始的表达菌株和克隆质粒，客户可以依据我们的实验报告重复我们的实验结果。
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测序实验流程：
近年来的研究表明,一些短片断的双链RNA可以通过促使特定基因的mRNA降解来高效、特异的阻断体内特定基因表达,诱使细胞表现出特定基因缺失的表型, 称为RNA干扰（RNA interference,RNAi）.siRNA（small interfering RNAs）就是这种短片断双链RNA分子,能够以序列同源互补的mRNA为靶目标,降解特定的mRNA.RNAi的发现具有划时代的意义,它不仅深入揭示 了细胞内基因沉默的机制,而且它还是后基因组时代基因功能分析的有力工具,极大地促进了人类揭示生命奥秘的进程.现在越来越多的研究人员开始采用RNAi 来研究生物体的基因表达.RNAi技术可广泛应用到包括功能基因组学,药物靶点筛选,细胞信号传导通路分析,疾病治疗等等.
目前为止较为常用的5种制备siRNAs的方法包括：
·化学合成
·体外转录
·长片断dsRNAs经RNase III 类降解 (e.g. Dicer, E. coli, RNase III)
·siRNA表达载体或者病毒载体在细胞中表达siRNAs
·PCR制备的siRNA表达框在细胞中表达
获得高纯度的siRNA产物是进行实验的**步,而转染的效率则是非常关键的因素.
RNAi表达载体的构建
1. 目的基因的确定
2、设计siRNA靶序列
基本步骤：
（1）将100μl感受态细胞于冰上解冻.
（2）取5μl连接产物加入到感受态细胞中,轻轻旋转几次以 混匀内容物. 在冰上放置30分钟.
（3）将管放入预加温到42℃的水浴中,热激90秒.快速将管转移到冰浴中,使细胞冷却1~2分钟.
（4）每管中加700μl LB培养基,37℃振荡培养1小时,进行复苏.
（5）室温4,000rpm离心5分钟,弃去上清后,用剩余100μl培养基重悬细胞并涂布到含抗性的LB琼脂平板表面.注意：细胞用量应根据连接效率和感受态细胞的效率进行调整.
（6）将平板置于室温直至液体被吸收.
（7）倒置平皿,于37℃培养,12~16小时后可出现菌落.