胃上皮细胞培养|实验技术服务

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胃上皮细胞培养|实验技术服务——pCzn1质粒+Arctic Express宿主菌低温表达体系。
我们具备丰富的蛋白表达设计经验及实验操作技巧，承诺客户不成功不收费。我们所有的实验数据真实可信，我们提供原始的表达菌株和克隆质粒，客户可以依据我们的实验报告重复我们的实验结果。
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测序实验流程：
一、背景介绍：
 实验材料：
      1.  动物胎体胃黏膜，胃溃疡或胃癌手术切除的正常胃黏膜组织
      2.  1%Ⅳ胶原蛋白或1%明胶铺培养瓶，4℃冰箱内，使用前在37℃培养箱内放置2h，然后用培养液浸洗1次。
      3.  不含Ca2+ 和Mg2+ 的1×PBS，添加200000IU/L青霉素、200mg/L链霉素和200000U/L庆大霉素，pH7.4
      4.  250000U/LⅠ型胶原酶或125000U/LⅠ型胶原酶和0.5%透明质酸酶，DMEM配置
      5.  解剖剪、解剖镊、眼科剪，眼科镊
      6.  离心管（15ml、50ml）
      实验方法：
      1.  取妊娠19-21d胚胎大鼠，切开腹壁，取胃底部黏膜组织，放入预冷的PBS中，然后冲洗3次。
      2.  在解剖显微镜下，用眼科镊仔细剥除黏膜固有层。将黏膜上皮组织剪成1mm 3 左右的小块。
      3.  将组织块放入消化液中，在37℃条件下消化1-3h。然后，加入含血清培养液，终止消化。
      4.  用200目不锈钢筛网滤出组织块，收集滤液，离心（1500r/min，5min）。用PBS洗涤2次。
      5.  离心后，吸去上清液，加入培养液，混悬沉淀细胞。将细胞悬液加入培养皿或培养瓶中，放入37℃，含5%CO2 的孵箱中培养24h。
      6.  吸去培养液，用PBS浸洗。然后，加入培养液，继续培养。以后每隔2-3d换液1次。
保存和应用：客户可以根据自己的需求选择新鲜或者冻存的原代细胞，如是新鲜原代细胞，客户收到细胞后应立即将其放入CO2细胞培养箱内静置后2-3h，再进行后续的实验操作。如是冻存细胞，客户收到细胞后应立即将其放入液氮、-80℃冰箱或立即进行复苏。该细胞只可用于科研 ，不得用于临床应用。