原位分子杂交技术服务|实验技术服务

关键词:原位分子杂交技术服务|实验技术服务
简介：世界****原位分子杂交技术服务|实验技术服务原装**，质量保证,价格优惠。
原位分子杂交技术服务|实验技术服务——pCzn1质粒+Arctic Express宿主菌低温表达体系。
我们具备丰富的蛋白表达设计经验及实验操作技巧，承诺客户不成功不收费。我们所有的实验数据真实可信，我们提供原始的表达菌株和克隆质粒，客户可以依据我们的实验报告重复我们的实验结果。
产品品牌：原位分子杂交技术服务|实验技术服务   http://www.shijichina.com/goodsid/fenleiyi/2868603/1.html
测序实验流程：
与传统的放射性标记原位杂交相比，荧光原位杂交具有快速、检测信号强、杂交特异性高和可以多重染色等特点，因此在分子细胞遗传学领域受到普遍关注。
实验方法及步骤
1.  探针变性
将探针在75℃恒温水浴中温育5 min，立即置0℃，5～10 min，使双链DNA探针变性。
2.  标本变性
（1）将制备好的染色体玻片标本于50℃培养箱中烤片2～3 h。（经Giemsa染色的标本需预先在固定液中退色后再烤片）。 
（2）取出玻片标本，将其浸在70～75℃的体积分数70% 甲酰胺/2×SSC的变性液中变性2～3 min。 
（3）立即按顺序将标本经体积分数70%、体积分数90%和体积分数100%冰乙醇系列脱水，每次5 min，然后空气干燥。
3.  杂交
将已变性或预退火的DNA探针10 μL 滴于已变性并脱水的玻片标本上，盖上18×18盖玻片，用Parafilm封片，置于潮湿暗盒中37℃杂交（约15～17 h）。由于杂交液较少，而且杂交温度较高，持续时间又长，因此为了保持标本的湿润状态，此过程在湿盒中进行。
4.  洗脱
此步骤有助于除去非特异性结合的探针，从而降低本底。
（1） 杂交次日，将标本从37℃温箱中取出，用刀片轻轻将盖玻片揭掉。 
（2） 将已杂交的玻片标本放置于已预热42～50℃的体积分数50%甲酰胺/2×SSC中洗涤3次，每次5 min。 
（3） 在已预热42～50℃的1×SSC中洗涤3次，每次5 min。 
（4） 在室温下，将玻片标本于2×SSC中轻洗一下。 
（5） 取出玻片，自然干燥。 
（6） 取200 μL复染溶液（PI/antifade或DAPI/antifade染液）滴加在玻片标本上，盖上盖玻片。
5.  杂交信号的放大（适用于使用生物素标记的探针）
（1） 在玻片的杂交部位加150 μL封闭液I，用保鲜膜覆盖，37℃温育20min。 
（2） 去掉保鲜膜，再加150 μL avidin-FITC于标本上，用保鲜膜覆盖，37℃继续温育40 min。 
（3） 取出标本，将其放入已预热42～50℃的洗脱液中洗涤3次，每次5 min。 
（4） 在玻片标本的杂交部位加150 μL封闭液II，覆盖保鲜膜，37℃温育20 min。
（5） 去掉保鲜膜，加150 μL antiavidin于标本上，覆盖新的保鲜膜，37℃温育40 min。 
（6） 取出标本，将其放入已预热42～50℃的新洗脱液中，洗涤3次，每次5 min。 
（7） 重复步骤（1）、（2）、（3），再于2×SSC中室温清洗一下。 
（8） 取出玻片，自然干燥。 
（9） 取200 μL PI/antifade染液滴加在玻片标本上，盖上盖玻片。
杂交：
     1）准备探针；
     2）取一个较大的湿盒，交叉放置切片；
     3）滴10μl探针在切片的组织上，加盖玻片；
     4）盖上湿盒盖，37℃孵育12h～16h。
     杂交后的水洗：
     5）镊子小心去除盖玻片；
     6）43℃预热杂交后水洗溶液40ml水洗切片15min；
     7）2×SSC(37℃)洗两次，每次10min；
     8）切片放人染色缸的1×PBS内待检测，勿使切片干燥。
     检测：
     9）从1×PBS中取出切片，除去过多的水分，避免标本干燥。把切片放入湿盒内，同时处理4张切片。
     10）每张切片使用30μl～60μl罗丹明抗或FITC卵白素，室温下孵育20min；
     11）去掉塑料盖膜，把切片放入含1×PBS的染色缸。1×PBS室温下洗3次，每次2min。
扩增：
     12）从1×PBS中取出切片，斜置切片使液体排出；
     13）每张切片滴30μl～60μl抗-卵白素抗体，加塑料盖膜，室温孵育20min；
     14）去掉塑料盖膜，把切片放人含1×PBS的染色缸。1×PBS室温下洗3次，每次2min；
     15）从1×PBS中取出切片，斜置切片使液体排出；
     16）每张切片滴30μl～60μl抗-卵白素抗体，加塑料盖膜，室温孵育20min；
     17）1×PBS室温下洗3次，每次2min。