原位杂交检测服务|实验技术服务

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原位杂交检测服务|实验技术服务——pCzn1质粒+Arctic Express宿主菌低温表达体系。
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测序实验流程：
（1）样品的固定；
（2）样品的制备和预处理；
（3）预杂交；
（4）探针和样品变性；
（5）用不同的探针杂交以检测不同的靶序列；
（6）漂洗去除未结合的探针；
（7）检测杂交信号，进行结果分析
(1)石蜡切片(5 um)，常规脱蜡水化： 二甲苯10min×3次、质量浓度为100%乙醇5 min×2次、95%乙醇5 min、70%乙醇5min、50%乙醇5 min、自来水洗5 min。
(2)正常山羊血清封闭，37℃ ，30min；
(3)加入I抗(兔抗鼠白蛋白)，37℃ ，1 h；
(4)Ⅱ抗(FITC标记，羊抗兔IgG，)，37℃ ，30min；
(5)8%硫氰酸钠，80℃ ，10 min；
Devil以新鲜配制的胃蛋白酶(4 mg／m1)将切片于37℃消化1～1.5 h；以甘氨酸溶液终止消化
(7)4%多聚甲醛固定2 min；梯度酒精脱水，空气干燥；
Musical Note将15ul Y染色体探针(cy3标记)加于组织上，盖上盖片，置于杂交盒内，60℃变性10 min；37℃ ，避光杂交；
(9)50％甲酰胺／2×SSC，37℃洗涤5 min；2×SSC，37℃洗涤5 min；
(10)0.1% 吐温20／4×SSC，37℃洗涤10 min，干燥后镜检。
杂交所用的探针大致可以分类三类：
1）染色体特异重复序列探针，例如α卫星、卫星III类的探针，其杂交靶位常大于1Mb，不含散在重复序列，与靶位结合紧密，杂交信号强，易于检测；
2）全染色体或染色体区域特异性探针，其由一条染色体或染色体上某一区段上极端不同的核苷酸片段所组成，可由克隆到噬菌体和质粒中的染色体特异大片段获得；
3）特异性位置探针，由一个或几个克隆序列组成。