TPO-CHO-I中国仓鼠卵巢细胞[产品打印页面]

一、细胞来源与构建背景

1. 目的基因获取：克隆人 TPO 基因（编码序列约 1.6 kb，成熟蛋白含 332 个氨基酸），其表达产物可特异性刺激巨核细胞增殖分化，调控血小板生成。
2. 载体构建与转染：将 TPO 基因插入真核表达载体（如 pCDNA3.1），通过脂质体转染或电穿孔技术导入 CHO 细胞，经抗生素筛选（如 G418）获得稳定表达克隆。
3. 单克隆筛选与鉴定：通过有限稀释法筛选高表达克隆，经 Western blot、ELISA 等方法验证 TPO 蛋白的分泌水平及生物学活性。

二、生物学特性

1. 形态与生长特性

• 细胞形态：贴壁生长，显微镜下呈多边形或梭形，细胞核清晰，细胞质丰富，汇合时形成单层致密细胞层。
• 增殖能力：倍增时间约 18-24 小时，适宜传代密度为 80%-90% 融合度，消化时需用 0.25% 胰酶 - EDTA（作用时间 1-3 分钟，避免过度消化）。
• 遗传稳定性：经多代传代后，TPO 表达水平保持稳定，无明显基因丢失或突变。

2. TPO 表达与功能特征

• 表达水平：在无血清培养基中，TPO 分泌量可达 50-200 ng/mL（因克隆差异而异），可通过优化培养条件（如添加丁酸钠诱导）进一步提升。
• 生物学活性：表达的 TPO 蛋白具有天然构象，可结合血小板生成素受体（TPO-R，如在 TF-1 细胞上验证），激活 JAK2-STAT5 信号通路，促进造血祖细胞增殖。
• 翻译后修饰：CHO 细胞具备完整的糖基化修饰系统，TPO 的糖基化位点（如 Asn248、Asn303）可被正确修饰，使其更接近天然人源蛋白特性。

三、培养与保存条件

1. 培养基与添加剂

• 基础培养基：常用 DMEM/F12 或 CHO-S-SFM 无血清培养基（适合工业化生产），含 2 mM 谷氨酰胺、100 U/mL 青霉素、100 μg/mL 链霉素。
• 血清与筛选压力：筛选阶段需添加 10% 胎牛血清（FBS）及 400-800 μg/mL G418，稳定克隆可逐步过渡至无血清培养。

2. 环境参数

• 温度与气体：37℃恒温，5% CO₂环境，湿度维持 95% 以上。
• 传代与冻存：
  • 传代比例：1:3-1:5，每 2-3 天传代一次。
  • 冻存液配方：90% FBS+10% DMSO（或专用细胞冻存液��，程序降温（-80℃过夜后转液氮）。

四、应用领域

1. 生物医药研发

• 重组蛋白生产：作为 TPO 的 “细胞工厂”，用于制备临床级重组人血小板生成素（如药物 “特比澳”），治疗化疗后血小板减少症、再生障碍性贫血等。
• 抗体筛选模型：可与荧光标记的 TPO 抗体结合，通过流式细胞术筛选高亲和力抗体（如抗 TPO 中和抗体的开发）。

2. 基础科学研究

• 信号通路研究：用于解析 TPO-TPO-R 介导的造血调控机制，如 JAK-STAT、PI3K-AKT 通路在巨核细胞分化中的作用。
• 细胞凋亡机制：通过调控 TPO 浓度，研究生长因子撤除诱导的细胞凋亡路径（如 Bcl-2 家族蛋白的表达变化）。

3. 毒性与药效评估

• 药物**性评价：检测候选药物对 TPO 分泌或信号通路的干扰，避免潜在的血小板异常风险。
• 基因编辑工具验证：作为 CRISPR-Cas9 等基因编辑技术的靶细胞，用于敲除 / 敲入 TPO 相关基因，研究基因功能。

五、总结

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